[發明專利]草酸診斷/測定試劑盒及草酸濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024719.9
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329328A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種草酸診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定草酸濃度的方法，屬于醫學/食品檢驗測定技術領域。

背景技術

草酸作為一種最簡單的二元羧酸，普遍存在于植物界中，植物草酸具有重要的生理功能，并且在植物抗逆性中發揮積極作用。草酸多以鉀鹽或鈣鹽的形式存在，而在秋海棠、芭蕉中卻以游離酸的形式存在，草酸有毒，能溶解于水。草酸是一種重要的化工原料，廣泛用于醫藥、染料、涂料、稀土金屬的分離和提純以及衣物的漂白。

測定草酸的方法有：離子色譜法、電導離子色譜法、HPLC方法。臨床上大多數結石屬草酸鈣結石。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及偶聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定草酸濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的草酸診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行草酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明草酸濃度測定方法原理如下：

草酸+氧草酸氧化酶二氧化碳+過氧化氫

二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶丙酮酸脫氫酶

丙酮酸+輔酶A+輔酶

這種方法應用草酸氧化酶(oxalate?oxidase；EC?1.2.3.4)偶聯丙酮酸脫氫酶(pyruvate?dehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應連續監測法/終點比色法。草酸氧化酶酶解草酸反應產生二氧化碳，再通過偶聯丙酮酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度/速度，通過測量340nm處吸光度下降的程度/速度，可以測算草酸的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明草酸診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液????????100mmol/L

穩定劑????????500mmol/L

還原型輔酶????0.25mmol/L

草酸氧化酶????10000U/L

丙酮酸脫氫酶??12000U/L

乙酰輔酶A?????20mmol/L

本發明的草酸診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶、乙酰輔酶A。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩定劑、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶。

還原型輔酶、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶、乙酰輔酶A在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩定劑、丙酮酸脫氫酶。

試劑3

緩沖液、穩定劑、草酸氧化酶。

還原型輔酶、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶、乙酰輔酶A在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定草酸濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的草酸診斷/測定試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液??100mmol/L

穩定劑?????????????????????????500mmol/L

還原型輔酶?????????????????????0.25mmol/L