[發明專利]L－蘋果酸診斷/測定試劑盒及L－蘋果酸的濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024718.4
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329327A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種L-蘋果酸診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定L-蘋果酸濃度的方法，屬于醫學/食品檢驗測定技術領域。

背景技術

蘋果酸有D-蘋果酸、DL-蘋果酸和L-蘋果酸。L-蘋果酸又名2-羥基丁二酸，是生物體三羧酸的循環中間體，易被人體吸收，因此作為性能優異的食品添加劑和功能性食品廣泛應用于食品、化妝品、醫療和保健品等領域。L-蘋果酸中含有天然的潤膚成分，可以清除皮膚表面皺紋，使皮膚變得嫩白、光潔而有彈性，因此在化妝品配方中備受青睞；L-蘋果酸可以配制多種香精、香料，用于多種日用化工產品，如牙膏、洗發香波等；國外將其用于替代檸檬酸作為新型洗滌助劑，用于合成高檔特種洗滌劑。L-蘋果酸可用于藥物制劑、片劑、糖漿中，還可以配入氨基酸溶液中，能明顯提高氨基酸的吸收率；L-蘋果酸可以用于治療肝病、貧血、免疫力低下、尿毒癥、高血壓、肝衰竭等多種疾病，并能減輕抗癌藥物對正常細胞的毒害作用；還可用于制備和合成驅蟲劑、抗牙垢劑等。另外L-蘋果酸還可以作為工業清洗劑、樹脂固化劑、合成材料增塑劑、飼料添加劑等。

中華人民共和國國家標準GB?13737-92有關食品添加劑L-蘋果酸的檢測是用蘋果酸氨鹽呈色試驗，是用化學方法顯色。另外，還有利用高錳酸鉀化學發光體系測定了DL-蘋果酸。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)技術，計量/連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定L-蘋果酸濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的L-蘋果酸診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行L-蘋果酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明L-蘋果酸濃度測定方法原理如下：

L-蘋果酸+輔酶??蘋果酸脫氫酶??草酰乙酸+還原型輔酶

這種方法應用蘋果酸脫氫酶(Malate?dehydrogenase；EC?1.1.1.37)酶促反應速率比色法/終點法。蘋果酸脫氫酶酶解L-蘋果酸反應同時將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過測量340nm處吸光度上升的程度/速度，可以測算L-蘋果酸的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑，如下成分關系的本發明L-蘋果酸診斷/側定試劑盒較為理想：

緩沖液??????????100mmol/L

穩定劑??????????500mmol/L

輔酶????????????3mmol/L

蘋果酸脫氫酶????10000U/L

本發明的L-蘋果酸診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、輔酶、蘋果酸脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、蘋果酸脫氫酶。

輔酶、蘋果酸脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑，本發明測定L-蘋果酸濃度的方法，其輔酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的L-蘋果酸診斷/測定試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液????100mmol/L

穩定劑???????????????????????????500mmol/L

輔酶?????????????????????????????3mmol/L

蘋果酸脫氫酶?????????????????????10000U/L

試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用前，加入純凈水，復溶后使用。