[發明專利]麥芽糖測定試劑盒及麥芽糖的濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024714.6
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329259A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/54;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種麥芽糖測定試劑盒，同時本發明還涉及測定麥芽糖濃度的方法，屬于食品檢驗測定技術領域。

背景技術

麥芽糖分子為無色或白色晶體，還原性二糖，有醛基反應，能發生銀鏡反應，也能與班氏試劑(用硫酸銅、碳酸鈉或苛性鈉、檸檬酸鈉等溶液配制)共熱生成磚紅色氧化亞銅沉淀。能使溴水褪色，被氧化成麥芽糖酸。用作食品、營養劑等。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，計量/連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定麥芽糖濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的麥芽糖測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行麥芽糖濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明麥芽糖濃度測定方法原理如下：

麥牙糖+磷酸根?麥芽糖磷酸化酶?葡萄糖+葡萄糖1-磷酸

葡萄糖+氧?葡萄糖氧化酶?葡糖酸內酯+過氧化氫

過氧化氫+輔酶?NAD(P)H氧化酶?還原型輔酶+氧

這種方法應用麥芽糖磷酸化酶(Disaccharide?phosphorylases；EC?2.4.1.8)(偶)聯葡萄糖氧化酶(glucose?oxidase；EC?1.1.3.4)、NAD(P)H氧化酶(NADPH?oxidase；EC?1.6.3.1)酶促反應速率比色法/終點法。麥芽糖磷酸化酶酶解麥芽糖反應產生葡萄糖，再通過(偶)聯合葡萄糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過測量340nm處吸光度上升的程度/速度，可以測算麥芽糖的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明麥芽糖測定試劑盒較為理想：

磷酸緩沖液????????100mmol/L

穩定劑????????????500mmol/L

輔酶??????????????3mmol/L

麥芽糖磷酸化酶????10000U/L

葡萄糖氧化酶??????12000U/L

NAD(P)H氧化酶?????12000U/L

本發明的麥芽糖測定試劑盒可以是單劑，包括：

磷酸緩沖液、穩定劑、輔酶、麥芽糖磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

磷酸緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

磷酸緩沖液、穩定劑、麥芽糖磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

輔酶、麥芽糖磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

磷酸緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

磷酸緩沖液、穩定劑、葡萄糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

試劑3

磷酸緩沖液、穩定劑、麥芽糖磷酸化酶。

輔酶、麥芽糖磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定麥芽糖濃度的方法，其輔酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的麥芽糖測定試劑為單試劑，包括：

磷酸緩沖液????????????100mmol/L

穩定劑????????????????500mmol/L