[發(fā)明專利]兔眼藍(lán)莓組織培養(yǎng)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710024502.8
• 申請(qǐng)日: 2007-06-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101069487A
• 公開(kāi)（公告）日: 2007-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張長(zhǎng)青;朱土農(nóng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 金陵科技學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所
• 代理人: 高桂珍

一技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及兔眼藍(lán)莓的植物組織培養(yǎng)方法。

二研究背景

兔眼藍(lán)莓是果樹中的珍品，風(fēng)味獨(dú)特，可鮮食，也可加工各種兔眼藍(lán)莓系列食品，還可以用作提取花色素的原料。其果實(shí)中的花色素為一種水溶性生物黃酮，具有預(yù)防近視、增強(qiáng)心臟功能、抗癌、抗心血管疾病作用。國(guó)際糧農(nóng)組織已將其列為人類五大保健食品之一。傳統(tǒng)扦插繁殖方法存在著生根難、繁殖系數(shù)低的缺限。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于兔眼藍(lán)莓組織培養(yǎng)的研究還不系統(tǒng)，高效繁育體系也很缺乏。

三發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的問(wèn)題是提供一種兔眼藍(lán)莓的高效組織培養(yǎng)方法。技術(shù)方案為：

1.誘導(dǎo)

將兔眼藍(lán)莓莖段接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。該培養(yǎng)基是在WPM常規(guī)培養(yǎng)基中添加了10毫克/升的玉米素。培養(yǎng)1個(gè)月后，待培養(yǎng)物長(zhǎng)出新梢后，即開(kāi)始下一個(gè)階段。

2.增殖

將第1步中所得的新梢剪下轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基是在WPM常規(guī)培養(yǎng)基中添加了5毫克/升的玉米素。培養(yǎng)1個(gè)月后，再用同樣方法繼代3次。然后進(jìn)入第三步。

3.生根

將第2步所得的小苗，轉(zhuǎn)移到常規(guī)生根培養(yǎng)基中。一個(gè)月后，小苗基部出現(xiàn)根系。再過(guò)15天后，進(jìn)入下一步。

4.煉苗

將第3步得到的生根苗栽在煉苗基質(zhì)中。該基質(zhì)組成物為草炭和石英砂，草炭和石英砂比例為1-3∶1。按照一般煉苗要求進(jìn)行管理后即可獲得大量成品苗。

本發(fā)明采用了三種特殊基質(zhì)，即誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和煉苗基質(zhì)。誘導(dǎo)培養(yǎng)基添加的玉米素濃度是10毫克/升；增殖培養(yǎng)基添加的玉米素濃度是5毫克/升；煉苗基質(zhì)是1-3∶1的草炭和石英砂組合。

采用本方法，在誘導(dǎo)階段一般3天就可以看到芽子萌動(dòng)，7天即有70％的芽子萌發(fā)。20天后，新梢長(zhǎng)度可達(dá)0.8-1.2厘米，葉片數(shù)量6-8片，大小近乎田間正常葉的1/3(圖1)。同時(shí)，在莖段和葉片上會(huì)出現(xiàn)明顯的白色粉狀物，葉色黃綠，鮮嫩，莖段底部膨大。在增殖階段，4天即可看到再生苗開(kāi)始生長(zhǎng)和分化現(xiàn)象，而且分化出來(lái)的新稍也明顯粗壯，增殖率可達(dá)到12倍以上(圖2)。在煉苗階段，成活率最高可達(dá)99％，一個(gè)月后的生長(zhǎng)量達(dá)1.2厘米以上，新增葉片2-4片(圖3)。

本發(fā)明的有益效果是：1.顯著提高了外植體的萌芽率和大于1厘米的枝條數(shù)；2.使新梢增殖率達(dá)到了12倍以上；3.幼苗的成活率達(dá)到了99％。

本發(fā)明解決了兔眼藍(lán)莓傳統(tǒng)扦插方法生根難、繁殖系數(shù)低的難題，為兔眼藍(lán)莓的開(kāi)發(fā)利用提供了一種工業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)成品苗的方法。

本發(fā)明所述兔眼藍(lán)莓可開(kāi)發(fā)成兔眼藍(lán)莓果汁、兔眼藍(lán)莓果酒、兔眼藍(lán)莓果醬、兔眼藍(lán)莓保健食品，以及制備抗腫瘤、治療心血管疾病的藥物。

四附圖說(shuō)明

圖1誘導(dǎo)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的兔眼藍(lán)莓莖段

圖2增殖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的兔眼藍(lán)莓新梢

圖3煉苗基質(zhì)中的兔眼藍(lán)莓成活苗

五具體實(shí)施方式

1.取材與消毒：田間采集未木質(zhì)化的新梢，清水沖洗2h后，酒精消毒30秒，無(wú)菌水沖洗3次。再用0.1％升汞再消毒10分鐘，無(wú)菌水沖洗3次。剪去葉片大小的2/3后，將枝條剪成1-2個(gè)芽的節(jié)段。

2.誘導(dǎo)培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)上，將剪好的莖段接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。該培養(yǎng)基組成為WPM+10毫克/升玉米素。

3.增殖培養(yǎng)

30天后可以獲得長(zhǎng)度在1厘米以上的大量新梢。將長(zhǎng)出的新梢移接在增殖培養(yǎng)基上開(kāi)始增殖。增殖培養(yǎng)基的組成為WPM+5毫克/升的玉米素。繼代3遍。

4.生根

將上一步獲得的莖段取出，接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。所用配方為1/2?WPM+0.1毫克/升的吲哚乙酸。

5.煉苗

提前3天打開(kāi)瓶蓋。移栽時(shí)，用鑷子小心取出幼苗，洗干凈。選擇生根的幼苗并移栽到草炭與石英砂之比為1-3∶1的基質(zhì)中，在完全封閉的塑料棚中于組培室內(nèi)度過(guò)15天。其間保持棚內(nèi)濕度100％。之后移入田間，并在密封的塑料棚中保持濕度80％、透光度70％情況下度過(guò)5天，開(kāi)始放風(fēng)。15天后，揭去棚膜。