[發明專利]谷氨酸診斷/測定試劑盒及谷氨酸濃度的測定方法

無效

• 申請號: 200710023395.7
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101324571A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種谷氨酸診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定谷氨酸濃度的方法，屬于醫學/食品檢驗測定技術領域。

背景技術

中華人民共和國國家標準GB5009-2003味精衛生標準分析方法有：1.旋光計法2.甲醛滴定法3.凱氏定氮法。味精系指以糧食及制品為原料經發酵提純的谷氨酸鈉。

酶法分析是國際上公認的谷氨酸鹽的分析方法，已被多個國際權威組織或機構采納：如IFU(國際果汁生產者協會)，AIJN(歐盟果蔬汁及飲料生產者聯盟)，及MEBAK，OICC，VDLUFA等組織廣為推崇，并確定為標準檢測方法。已被寫入澳大利亞，荷蘭，德國，瑞士等多個國家的食品法。國內也有數家果汁、酒類加工企業使用酶法試劑盒作為檢測標準。

生物體內存在分解骨質的破骨細胞和形成骨骼的成骨細胞，正常情況下兩種細胞的作用保持著良好的平衡。如果平衡被打破、破骨細胞過于活躍，就會導致骨質疏松。破骨細胞中含有谷氨酸，而一種名為“谷氨酸轉運體”的蛋白可以將谷氨酸排出破骨細胞，被“釋放”的谷氨酸會和細胞表面的受體結合，激活細胞內的酶，抑制破骨細胞分解骨質的作用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，計量/連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定谷氨酸濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的谷氨酸診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行谷氨酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明谷氨酸濃度測定方法原理如下：

L-谷氨酸+氧+水谷氨酸氧化酶氨離子+2-酮戊二酸酯

????????????????????????????????????+過氧化氫

過氧化氫+輔酶NAD(P)H氧化酶還原型輔酶+氧

這種方法應用谷氨酸氧化酶(glutamate?oxidase；EC?1.4.3.7；EC?1.4.3.11)偶聯NAD(P)H氧化酶(NAD(P)H?oxidase；EC?1.6.3.1)酶促反應速率比色法/終點法。谷氨酸氧化酶酶解谷氨酸反應產生過氧化氫，再通過偶聯NAD(P)H氧化酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過測量340nm處吸光度上升的程度/速度，可以測算谷氨酸的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明谷氨酸診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????????????????100mmol/L

穩定劑????????????????????????500mmol/L

輔酶??????????????????????????3mmol/L

谷氨酸氧化酶??????????????????10000U/L

NAD(P)H氧化酶?????????????????12000U/L

本發明的谷氨酸診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、輔酶、谷氨酸氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、谷氨酸氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

輔酶、谷氨酸氧化酶、NAD(P)H氧化酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、NAD(P)H氧化酶。

試劑3

緩沖液、穩定劑、谷氨酸氧化酶。