[發(fā)明專利]甲酸診斷/測(cè)定試劑盒及甲酸濃度測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710023394.2
• 申請(qǐng)日: 2007-06-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101324519A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甲酸診斷/測(cè)定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定甲酸濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境/工業(yè)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甲酸(HCOOH)在室溫下有自然分解的特性，同時(shí)，測(cè)試過(guò)程中不可避免地有一部分水分混入甲酸，甲酸是無(wú)色透明和發(fā)煙的液體.有濃烈的刺激性酸味。一般在工業(yè)及環(huán)境監(jiān)測(cè)中使用氣相色譜法；在醫(yī)藥及農(nóng)業(yè)上使用酶法分析，酶法分析已被多個(gè)國(guó)際權(quán)威組織或機(jī)構(gòu)采納：如IFU(國(guó)際果汁生產(chǎn)者協(xié)會(huì))，AIJN(歐盟果蔬汁及飲料生產(chǎn)者聯(lián)盟)，及MEBAK，OICC，VDLUFA等組織廣為推崇，并確定為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，監(jiān)測(cè)還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處吸光度的變化，得以測(cè)定甲酸濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的甲酸診斷/測(cè)定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見(jiàn)光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行甲酸濃度測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明甲酸濃度測(cè)定方法原理如下：

甲酸+高鐵細(xì)胞色素甲酸脫氫酶二氧化碳+亞鐵細(xì)胞色素

二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶丙酮酸脫氫酶丙酮酸+

??????????????????????????????????????輔酶A+輔酶

這種方法應(yīng)用甲酸脫氫酶(formate?dehydrogenase；EC?1.2.2.1；EC1.2.2.3)偶聯(lián)丙酮酸脫氫酶(pyruvate?dehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法/終點(diǎn)比色法。甲酸脫氫酶酶解甲酸反應(yīng)產(chǎn)生二氧化碳，再通過(guò)偶聯(lián)丙酮酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒(méi)有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度/速度，通過(guò)測(cè)量340nm處吸光度下降的程度/速度，可以測(cè)算甲酸的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無(wú)論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明甲酸診斷/測(cè)定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????????????500mmol/L

還原型輔酶????????????????????0.25mmol/L

高鐵細(xì)胞色素??????????????????10mmol/L

乙酰輔酶A?????????????????????15mmol/L

甲酸脫氫酶????????????????????10000U/L

丙酮酸脫氫酶??????????????????15000U/L

本發(fā)明的甲酸診斷/測(cè)定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、高鐵細(xì)胞色素、乙酰輔酶A、甲酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、高鐵細(xì)胞色素、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、甲酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶。

還原型輔酶、高鐵細(xì)胞色素、乙酰輔酶A、甲酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、高鐵細(xì)胞色素、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、。丙酮酸脫氫酶。

試劑3

緩沖液、穩(wěn)定劑、甲酸脫氫酶。

還原型輔酶、高鐵細(xì)胞色素、乙酰輔酶A、甲酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無(wú)論是單劑、雙劑還是三劑，本發(fā)明測(cè)定甲酸濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實(shí)施方式