[發(fā)明專利]乙酸測定試劑盒及乙酸濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710023372.6
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101324512A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發(fā)明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種乙酸測定試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定乙酸濃度的方法，屬于食品/環(huán)境檢驗測定技術領域。

背景技術

隨著配制食醋標準的出臺，食品添加劑乙酸(醋酸)的質量合格與否又直接關系著人民身體健康與否。在條文強制性標準配制食醋G?B10337-2000中明確規(guī)定，配制食醋所用的乙酸應符合G?B?1903-1996的規(guī)定，即應符合食品添加劑醋酸的要求。用工業(yè)醋酸假冒“食品添加劑醋酸”，例如，使用某些副產品或回收的工業(yè)醋酸進行脫色，濃度不夠時加入鹽酸、磷酸等以增加酸度。這類醋酸對人體的危害很大，因為這類醋酸不僅含有添加的有毒、有害無機物，還含些很難說清的有害有機物。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術，監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定乙酸濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的乙酸測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行乙酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發(fā)明乙酸濃度測定方法原理如下：

乙酸+腺苷三磷酸+輔酶A乙酰輔酶A合成酶

腺苷單磷酸+二磷酸+乙酰輔酶A

乙酰輔酶A+二氧化碳+還原型輔酶丙酮酸脫氫酶

丙酮酸+輔酶A+輔酶

這種方法應用乙酰輔酶A合成酶(Acyl-coenzyme-A?synthetase；EC6.2.1.1；EC?6.2.1.3)酶(偶)聯(lián)丙酮酸脫氫酶(pyruvate?dehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應連續(xù)監(jiān)測法/速率比色法。乙酰輔酶A合成酶酶解乙酸反應產生乙酰輔酶A，再通過(偶)聯(lián)合丙酮酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度/速度，通過測量340nm處吸光度下降的程度/速度，可以測算乙酸的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發(fā)明乙酸測定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????500mmol/L

還原型輔酶????????????0.25mmol/L

腺苷三磷酸????????????10mmol/L

輔酶A?????????????????5mmol/L

二氧化碳??????????????20mmol/L

乙酰輔酶A合成酶???????10000U/L

丙酮酸脫氫酶????????12000U/L

本發(fā)明的乙酸測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、輔酶A、二氧化碳、乙酰輔酶A合成酶、丙酮酸脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、輔酶A、二氧化碳。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、乙酰輔酶A合成酶、丙酮酸脫氫酶。

還原型輔酶、腺苷三磷酸、輔酶A、二氧化碳、乙酰輔酶A合成酶、丙酮酸脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、輔酶A、二氧化碳。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、丙酮酸脫氫酶。

試劑3

緩沖液、穩(wěn)定劑、乙酰輔酶A合成酶。

還原型輔酶、腺苷三磷酸、輔酶A、二氧化碳、乙酰輔酶A合成酶、丙酮酸脫氫酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發(fā)明測定乙酸濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實施方式