[發明專利]活性分子復合生物肥料及其生產方法

無效

• 申請號: 200710023306.9
• 申請日: 2007-06-08
• 公開（公告）號: CN101070256A
• 公開（公告）日: 2007-11-14
• 發明（設計）人: 連賓;侯衛國
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C05G1/00
• 分類號: C05G1/00;C05F11/08;C12N1/20;C12R1/41
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及農業生物肥料領域，具體是一種活性分子復合生物肥料及其生產方法。

背景技術

根瘤菌是豆科植物根系上生長的細菌，它能夠在常溫下，把從空氣中吸收和固定的游離氮轉化成自身可以直接利用的氮素。不同的豆科植物具有不同的根瘤菌，約有90％的豆科牧草根部都有根瘤菌，根瘤菌需要的水分、碳水化合物和礦物質由豆科植物發達的根系提供。早在1896年西歐各國已有商業化的豆科根瘤菌接種劑出現，為農民提供固氮能力較強的根瘤菌，增加農業產量。現在根瘤菌制劑已得到廣泛應用，僅在美國就有大規模制作根瘤菌接種劑的工廠數十家之多，產品銷往全國各地。我國對根瘤菌的研究與開發也十分重視，但由于各種原因，研究的水平和開發的效果仍大大落后于發達國家。

結瘤因子是一類由根瘤菌分泌的信號分子，它們在結瘤的起始階段發揮重要作用。通過盆栽實驗發現染料木黃酮可以提高大豆的結瘤數和大豆的固氮水平。研究發現經過染料木黃酮誘導，慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium?japonicum)產生的結瘤因子能增加大豆產量，提高大豆蛋白質含量，同時也是一種植物生長調節劑，結瘤因子對種子發芽率和幼苗生長速度都有提高，結瘤因子也有抗植物真菌病的效果。已經證明大豆分泌的木黃酮類物質和茉莉酸甲酯都可以誘導得到結瘤因子。為了降低成本，發明人用數種豆科植物和非豆科植物根浸提液作為誘導劑，結果發現大豆、玉米和小麥的根浸提液都可誘導B.japonicum產生結瘤因子。

微生物肥是植物生長發育過程中不可缺少的營養元素，把微肥稀釋后作葉面肥噴施，花錢少、見效快、效益高。推廣使用生物肥料是推進生態農業、綠色農業的重要途徑，生物肥料具有改良土壤、保護生態環境等明顯的生態效益。生物肥料在和化學肥料配合使用后可大大促進作物對磷、鉀的吸收，同時吸收空氣中的氮。它的這兩種特性一方面提高了化學肥料利用率，固定空氣中的氮素并使之轉化為優質氮素養料，使作物生長更加茁壯、迅速，作物更加高產；另一方面對生態環境也起著積極作用。中國專利申請“高效多功能復合微生物肥及其工業制造方法”(專利申請號：99111130.3)公開了一種含根瘤菌的微生物肥。但效果有待進一步提高。

發明人在研究共生固氮的基礎上開發出一種高效生物制劑，即結瘤因子活性分子復合生物肥料，該活性分子復合生物肥料的開發為農業生產提供一個新型復合生物肥料品種。

發明內容

本發明的目的是提供一種結瘤因子活性分子復合生物肥料，本肥料含有根瘤菌、結瘤因子、微量元素和大量元素等，對農作物尤其豆科植物有明顯的增產效果，可應用于苜蓿、三葉草、豌豆、菜豆、羽扁豆、大豆、豇豆等豆科作物。該制劑含有的結瘤因子和根瘤菌能夠增強豆科植物固氮作用，同時為作物生長提供所需的微量元素和常量元素，保障作物的高產，而且不會污染周圍的環境。

本發明所說的活性分子復合生物肥料，其特征在于：由獨立包裝的根瘤菌菌體和獨立包裝的結瘤因子復合液組成，其中所說的結瘤因子復合液含有結瘤因子300ug/L、硫酸銅0.2-0.4％，硼砂或硼酸1-5％、鉬酸銨0.4-1％、硫酸鋅1-4％、硫酸錳1-2％、硫酸亞鐵1-2％。

本發明的另一個目的是提供所說的活性分子復合生物肥料的制備方法，其步驟是：

①誘導劑制備：每80g大豆根加入500mL水研磨后，用0.45μm濾膜過濾后得誘導劑；

②種子液制備：YEM培養基接種慢生型大豆根瘤菌Bradyrhizobium?japonicum，28℃，150轉每分(rpm)培養直至OD₆₂₀值0.4-0.6(約4-6天)制成種子液；

③擴大培養及誘導：以5％比例將種子液接種到二級YEM培養液中，28℃，150rpm培養直至OD₆₂₀值0.8-1.0，加入0.6％誘導物，再培養2天；

④活性分子復合生物肥料制備：離心發酵液，沉淀的菌體用已滅菌處理的吸附劑吸附，得到的根瘤菌菌體單獨無菌包裝；將上清液加入Fe、Mo、Mn、Zn和B等微量元素后，單獨無菌包裝；所說的的微量元素濃度為：硫酸銅0.2-0.4％，硼砂或硼酸1-5％，鉬酸銨0.4-1％，硫酸鋅1-4％，硫酸錳1-2％，硫酸亞鐵1-2％。

現有的慢生型大豆根瘤菌Bradyrhizobium?japonicum都能用于本發明，但本發明優選慢生型大豆根瘤菌ACCC15055和慢生型大豆根瘤菌ACCC15063。