[發明專利]腺苷脫氨酶診斷試劑盒及腺苷脫氨酶活性濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710023239.0
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101324567A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 沈麗華
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種腺苷脫氨酶診斷試劑盒，同時本發明還涉及測定腺苷脫氨酶活性濃度的方法，屬于醫學檢驗測定技術領域。

背景技術

醫學研究表明，腺苷脫氨酶是一種與機體細胞免疫活性有重要關系的核酸代謝酶。因此，腺苷脫氨酶活性的測定被作為良惡性胸腹水，腦脊液鑒別診斷，重癥聯合免疫缺陷病(SCID)，急、慢性肝炎，肝硬化，肝癌等疾病鑒別的重要診斷標志。

腺苷脫氨酶的活性測定方法主要有放射核素法、物理方法和生化法。據申請人了解，目前國際上普遍采用紫外光法，其測定原理是：腺苷(白色結晶粉末)+水(H₂O)腺苷脫氨酶肌苷(Inosine)+氨離子(NH₄⁺)，此反映過程生成的肌苷會在波長為265nm處顯現，因此可以通過測定此波長處吸光度的大小直接反映腺苷脫氨酶活性的大小。然而，此方法無法用一般醫院的可見光分析儀測定，而需要使用專門的紫外光分析儀，因此難以切實推廣應用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定腺苷脫氨酶活性濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的腺苷脫氨酶診斷試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行腺苷脫氨酶活性濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明腺苷脫氨酶活性濃度測定方法原理如下：

腺苷+水??腺苷脫氨酶??肌苷+氨離子

氨離子+丙酮酸+吲哚??色氨酸酶??色氨酸+水

色氨酸??多巴脫羧酶??色胺+二氧化碳

二氧化碳+還原型輔酶??甲酸脫氫酶??甲酸+輔酶

這種方法應用腺苷脫氨酶(Adenosine?deaminase；EC?3.5.4.4)酶(偶)聯色氨酸酶(tryptophanase；EC?4.1.99.1)、多巴脫羧酶(DOPA?decarboxylaseEC?4.1.1.28)、甲酸脫氫酶(Formate?dehydrogenase；EC?1.2.1.2；EC?1.2.1.43)酶促反應連續監測法。腺苷脫氨酶酶解腺苷反應產生氨離子，再通過(偶)聯合色氨酸酶、多巴脫羧酶、甲酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算腺苷脫氨酶的活性濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明腺苷脫氨酶診斷試劑較為理想：

緩沖液??????????????????100mmol/L

穩定劑??????????????????500mmol/L

還原型輔酶??????????????0.25mmol/L

腺苷????????????????????5mmol/L

丙酮酸??????????????????15mmol/L

吲哚????????????????????10mmol/L

色氨酸酶????????????????10000U/L

多巴脫羧酶??????????????10000U/L

甲酸脫氫酶??????????????12000U/L

本發明的腺苷脫氨酶診斷試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、色氨酸酶、多巴脫羧酶、甲酸脫氫酶、腺苷、丙酮酸、吲哚。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、腺苷、丙酮酸、吲哚。

試劑2

緩沖液、穩定劑、色氨酸酶、多巴脫羧酶、甲酸脫氫酶。