[發(fā)明專利]二氧化碳診斷/測(cè)定試劑盒及二氧化碳濃度測(cè)定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710023220.6
• 申請(qǐng)日: 2007-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN101324604A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/84
• 分類號(hào): G01N33/84;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種二氧化碳診斷/測(cè)定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定二氧化碳濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

血液內(nèi)二氧化碳的含量對(duì)人體內(nèi)酸堿平衡的調(diào)節(jié)起著重要的作用。血液pH的恒定是維持生命活動(dòng)必不可少的條件，血漿中的多種緩沖系統(tǒng)中以碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)最為重要，直接影響血液的pH。

血液內(nèi)二氧化碳的含量變化主要反映代謝性酸堿平衡紊亂。單純代謝性酸或堿中毒時(shí)，血液碳酸氫根[HCO₃^-]下降或升高，總二氧化碳也隨之下降或升高。而單純呼吸性酸或堿中毒時(shí)，血液碳酸氫根升高或下降。

總二氧化碳和碳酸氫根的測(cè)定方法較可分為直接測(cè)定和間接推算兩類。直接測(cè)定主要有量氣法、量壓法、滴定法、比色法、Conway微量擴(kuò)散法、流動(dòng)注射氣體擴(kuò)散法等。間接推算是利用血?dú)夥治鰞x測(cè)得的PH與PCO₂，根據(jù)H-H方程的變換形式：

HCO₃^-(m?mol/L)＝0.03×PCO²(mm?Hg)×antilog(PH-p?ka)或

HCO₃^-(m?mol/L)＝0.225×PCO₂(k?Pa)×antilog(PH-p?Ka)

計(jì)算獲得。

式中：PH為37℃時(shí)測(cè)得值，p?ka在37℃為6.10。

目前，以間接推算法應(yīng)用較普遍，由血液分析儀的微處理計(jì)算機(jī)并與血?dú)夥治鼋Y(jié)果一起報(bào)告，準(zhǔn)確性基本可以符合臨床要求。

直接測(cè)定法以滴定法應(yīng)用最廣泛，但由于受多種因素影響，測(cè)定誤差較大。

酶法測(cè)定適合自動(dòng)化分析，結(jié)果可靠，應(yīng)當(dāng)是很有前途的測(cè)定方法，但目前尚有待深入研究。

檢索中國(guó)專利發(fā)現(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)枮?6190276.0、申請(qǐng)日為1996.02.06的發(fā)明專利申請(qǐng)公開了一種用來導(dǎo)出病人血液中氣體含量的非侵入性的系統(tǒng)和方法。該系統(tǒng)相應(yīng)于體積測(cè)量呼氣中的二氧化碳濃度。然后處理該數(shù)據(jù)導(dǎo)出動(dòng)脈血中二氧化碳?xì)怏w水平。若數(shù)據(jù)為時(shí)間域，處理可將時(shí)間域數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成體積域。該方法也經(jīng)迭代評(píng)估了多個(gè)變量的顯著性，所得的關(guān)系可供快速和準(zhǔn)確地對(duì)健康人和患肺病病人進(jìn)行血中氣體含量的測(cè)定。近年來，申請(qǐng)?zhí)枮?2282386.7、申請(qǐng)日為2002.10.29的實(shí)用新型專利公開了一種醫(yī)用的血液碳酸氫根測(cè)定儀，主要由操作面板、進(jìn)樣檢測(cè)機(jī)構(gòu)、定滴加液機(jī)構(gòu)、攪拌機(jī)構(gòu)和以單片機(jī)為主控元件的電器控制部分組成。其操作面板包括有手動(dòng)按鍵、輸入鍵盤和顯示屏；進(jìn)樣檢測(cè)機(jī)構(gòu)由沿圓周均布樣本孔且在孔內(nèi)放置樣本瓶的樣本轉(zhuǎn)盤和豎直裝配在轉(zhuǎn)盤下面的驅(qū)動(dòng)電機(jī)及對(duì)應(yīng)于檢測(cè)位樣本孔設(shè)置的光電檢測(cè)器組成；定滴加液機(jī)構(gòu)由配置電機(jī)的微量泵和設(shè)置于樣本孔上方的定滴頭及配置在定滴頭滴液口處的計(jì)滴器組成；攪拌機(jī)構(gòu)由設(shè)置在樣本轉(zhuǎn)盤下方相應(yīng)位置的攪拌電機(jī)和裝配在攪拌電機(jī)軸上的磁盤及放置于樣本瓶?jī)?nèi)的攪拌棒組成。

以上專利均與酶法測(cè)定無關(guān)，這從一個(gè)側(cè)面說明，國(guó)內(nèi)此方面的實(shí)驗(yàn)研究十分缺乏。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，監(jiān)測(cè)還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處吸光度的變化，得以測(cè)定二氧化碳濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的二氧化碳診斷/測(cè)定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行二氧化碳濃度測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明二氧化碳濃度測(cè)定方法原理如下：

二氧化碳+腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸羧化酶

???????????????????腺苷二磷酸+磷酸根+草酰乙酸

草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶L-蘋果酸+輔酶