[發(fā)明專利]錳離子診斷/測定試劑盒及錳離子濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710023206.6
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN101324596A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/84
• 分類號(hào): G01N33/84;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種錳離子診斷/測定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測定錳離子濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

錳作為一種微量元素在人體中是不可或缺的必需成分，同時(shí)也是對人體有毒的物質(zhì)。在自然狀態(tài)下，以兩價(jià)、三價(jià)和四價(jià)的形式存在，氧化程度越低，毒性越高。通常錳有八種不同的氧化狀態(tài)。錳的生物學(xué)意義是作為人體中輔助因子有多種多樣的功能。然而，在許多酶激活反應(yīng)中，Mn²⁺和Mg²⁺可互相替代。

常用石墨爐原子吸收分光光度測定法、原子發(fā)射ICP-OES。中子激發(fā)分析(NAA)是最好的方法，但僅能在一些條件好的實(shí)驗(yàn)室才能測定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶循環(huán)擴(kuò)增法(Enzymatic?Recycling?Method)、酶比色法(Enzymatic?ColorimetricMethod)及酶聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，計(jì)量通過酶聯(lián)反應(yīng)生成吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)所導(dǎo)致在400-700nm波長處吸光度的上升，得以測定錳離子濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的錳離子診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在可見光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行錳離子濃度測定，而且測定速度快、靈敏度大、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明錳離子濃度測定方法原理如下：

草酰乙酸?草酰乙酸脫羧酶/Mn²⁺?丙酮酸+二氧化碳

丙酮酸+氨離子+還原型輔酶?丙氨酸脫氫酶?L-丙氨酸

??????????????????????????????????????+水+輔酶

丙氨酸+水+氧?甘氨酸氧化酶?氨離子+丙酮酸+

?????????????????????????????????過氧化氫

過氧化氫+還原型色原體組合?過氧化物酶?吲嗒胺色原或

?????????????????????????????????????醌亞胺色原+水

這種方法應(yīng)用需要錳離子激活的草酰乙酸脫羧酶(oxaloacetatedecarboxylase；EC?4.1.1.3)酶(偶)聯(lián)丙氨酸脫氫酶(alaninedehydrogenase；EC?1.4.1.1)、甘氨酸氧化酶(glycine?oxidase；EC1.4.3.19)及過氧化物酶(peroxidase；EC?1.11.1.7)酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法。草酰乙酸脫羧酶作為作用酶，在錳離子的激活下，功能為將草酰乙酸酶解產(chǎn)生丙酮酸。丙氨酸脫氫酶也作為作用酶，它的酶促作用使丙酮酸變成丙氨酸。甘氨酸氧化酶作為循環(huán)酶將丙氨酸再次變回丙酮酸，使草酰乙酸脫羧酶酶解草酰乙酸產(chǎn)生的丙酮酸不斷地被重復(fù)循環(huán)利用。因此連續(xù)不斷地產(chǎn)生過氧化氫。過氧化物酶(peroxidase；EC?1.11.1.7)作為顯色酶，通過和過氧化氫的作用，使無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400-700nm(根據(jù)還原型色原體組合的不同而定)波長處測定染料-吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)-含量高低的光吸收大小速度，得出錳離子濃度大小測定結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，如下成分關(guān)系的本發(fā)明錳離子診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液?????????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑?????????????????????????500mmol/L

還原型輔酶?????????????????????0.25mmol/L

氨離子?????????????????????????2mmol/L

草酰乙酸???????????????????????20mmol/L

草酰乙酸脫羧酶?????????????????10000U/L

丙氨酸脫氫酶???????????????????10000U/L