[發明專利]錳離子診斷/測定試劑盒及錳離子濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710023201.3
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101324591A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種錳離子診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定錳離子濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

錳作為一種微量元素在人體中是不可或缺的必需成分，同時也是對人體有毒的物質。在自然狀態下，以兩價、三價和四價的形式存在，氧化程度越低，毒性越高。通常錳有八種不同的氧化狀態。錳的生物學意義是作為人體中輔助因子有多種多樣的功能。然而，在許多酶激活反應中，Mn²⁺和Mg²⁺可互相替代。

常用石墨爐原子吸收分光光度測定法、原子發射ICP-OES。中子激發分析(NAA)是最好的方法，但僅能在一些條件好的實驗室才能測定。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定錳離子濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的錳離子診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行錳離子濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明錳離子濃度測定方法原理如下：

草酸+氧??草酸氧化酶/Mn²⁺??二氧化碳+過氧化氫

二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶??丙酮酸脫氫酶

??????????????????????????丙酮酸+輔酶A+輔酶

這種方法應用需要錳離子激活的草酸氧化酶(oxalate?oxidase；EC1.2.3.4)酶(偶)聯丙酮酸脫氫酶(pyruvate?dehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應連續監測法/速率比色法。草酸氧化酶，在錳離子的激活下，酶解草酸反應產生二氧化碳，再通過(偶)聯合丙酮酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算錳離子的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明錳離子診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液???????100mmol/L

穩定劑???????500mmol/L

還原型輔酶???0.25mmol/L

草酸?????????20mmol/L

乙酰輔酶A????20mmol/L

草酸氧化酶???10000U/L

丙酮酸脫氫酶????10000U/L

本發明的錳離子診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、草酸、乙酰輔酶A、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、草酸、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩定劑、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶。

還原型輔酶、草酸、乙酰輔酶A、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、草酸、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩定劑、丙酮酸脫氫酶。

試劑3

緩沖液、穩定劑、草酸氧化酶。

還原型輔酶、草酸、乙酰輔酶A、草酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定錳離子濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實施方式