[發(fā)明專利]重組雞痘病毒疫苗rFPV－1218AIH5/H9及其構(gòu)建方法、用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710022680.7
• 申請日: 2007-05-25
• 公開（公告）號: CN101066448A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉秀梵;陳素娟;孫蕾;劉武杰
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: A61K39/275
• 分類號: A61K39/275;A61P31/16;C12N15/85
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務(wù)所
• 代理人: 江平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種重組雞痘病毒疫苗，特別是一種用雞痘病毒新的復(fù)制非必需區(qū)構(gòu)建共表達H5和H9亞型禽流感病毒主要保護性抗原基因的重組雞痘病毒聯(lián)合疫苗。

背景技術(shù)

雞痘病毒(Fowlpox?Virus，簡稱：FPV)為痘病毒科、禽痘病毒屬的成員，是迄今發(fā)現(xiàn)的動物病毒中最大的一種病毒。最獨特的性質(zhì)是它們在感染細(xì)胞的胞漿復(fù)制，而不在細(xì)胞核內(nèi)。成熟的病毒粒子為磚型，大小為250×350nm，F(xiàn)PV的基因組為雙股線性DNA，大小約300kb，分子量約為2～4×10⁵KD，G+C含量達35％，且其DNA不具有感染性。通過重組DNA技術(shù)，以FPV為載體研制禽類基因工程重組活病毒疫苗，或哺乳動物非復(fù)制型重組活病毒載體疫苗受到越來越多研究者的重視。FPV基因組寵大，可插入較長外源基因，構(gòu)建多價或多聯(lián)重組病毒活疫苗，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫。FPV載體與已報道的病毒載體如痘苗病毒、乳頭狀瘤病毒、腺病毒、細(xì)小病毒、馬立克氏病病毒、煙草花葉病毒等相比具有明顯的優(yōu)勢。FPV自然條件下只感染禽類，但能在哺乳動物細(xì)胞產(chǎn)生頓挫性感染，雖不產(chǎn)生有感染性的子代病毒粒子，卻能自動合成加工外源抗原并提呈到細(xì)胞表面，刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。

已有多種類型的具有生物活性的蛋白質(zhì)在重組雞痘病毒(recombinantfowlpox?virus，rFPV)中得到表達。如禽流感病毒(即：AIV)的血凝素基因(HA)、新城疫病毒(NDV)的融合蛋白(F)和血凝素-神經(jīng)氨酸酶(HN)基因、馬立克氏病病毒(MDV)的gB基因、傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的VP2基因、狂犬病病毒糖蛋白和麻疹病毒融合蛋白基因等，以表達外源基因的rFPV進行免疫，在SPF雞或無母源抗體的商品雞均可提供特異性的免疫保護，因此，F(xiàn)PV載體不僅可以用作家禽的疫苗，而且可以用作哺乳動物的疫苗。

現(xiàn)有技術(shù)中，F(xiàn)PV疫苗在商品禽中已使用了70多年，此疫苗可引起輕微的、自限性局部感染。同時，F(xiàn)PV宿主范圍較窄，僅感染禽，因此是相對比較安全的疫苗病毒。

雞痘病毒載體已經(jīng)研究了近二十年，但能應(yīng)用于臨床的重組病毒寥寥無幾，原因何在？一個主要原因就是母源抗體的干擾。就拿我國的現(xiàn)狀來說，為控制疫情的發(fā)生，減少經(jīng)濟損失，種雞一般需要反復(fù)接種針對MDV、NDV、AIV、IBDV、FPV等的多種疫苗，導(dǎo)致我國的商品雞普遍帶有高母源抗體。其中針對H9N2亞型AIV的母源抗體高達2⁷-2⁸，H5N1亞型AIV的母源抗體也達到了2⁵-2⁶，這就給商品雞疫苗的使用和疫情的監(jiān)測帶來不便。

Taylor等發(fā)現(xiàn)，在有較高ND母源抗體的試驗雞上，共表達NDV?F和HN基因的重組FPV的抵抗NDV強毒攻擊的免疫保護率較在SPF雞上有所下降。因此，針對外源基因的抗體干擾了重組FPV的免疫(Taylor?J，Christensen?L，Gettig?R，et?al.Efficacy?of?a?recombinant?fowlpox-basedNewcastle?disease?virus?vaccine?candidate?against?velogenic?and?respiratorychallenge.Avian?Dis，1996，40(1)：173-80.)。本室共構(gòu)建的9個表達HPAIV基因的rFPVs無論是否能夠誘導(dǎo)HI抗體，在SPF雞上均能抵抗強毒AIV的攻擊，免疫保護率均為100％，構(gòu)建的3個共表達HPAIV和MPAIV?HA基因的重組苗在SPF雞上均能抑制MPAIV的排出，免疫效力與油苗相當(dāng)。而在帶有高水平AIV母源抗體的商品雞上，保護率均有不同程度的下降。表明針對外源蛋白的母源抗體對重組FPV的免疫效力確實存在一定的影響。另有構(gòu)建的NDV的主要保護性抗原的重組病毒疫苗進行的商品雞試驗試驗結(jié)果也表明，重組FPV的免疫效力因存在針對NDV或AIV的母源抗體而受到很大的影響(丁煒東，曹麗萍，張體銀等.表達新城疫病毒F和HN基因重組雞痘病毒疫苗的遺傳穩(wěn)定性和免疫效力試驗.中國獸醫(yī)雜志，2005，41：10-14.韋棟平，劉玉良，邵衛(wèi)星等.共表達新城疫F基因和H9亞型禽流感病毒HA基因的重組雞痘病毒.微生物學(xué)報，2004，44：14-18.)。