[發明專利]一種能夠消化瓊脂的真菌

無效

• 申請號: 200710021152.X
• 申請日: 2007-03-30
• 公開（公告）號: CN101054555A
• 公開（公告）日: 2007-10-17
• 發明（設計）人: 何興兵;田興軍;張鵬;任利利
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 高桂珍

一、技術領域

本發明屬于工業微生物技術領域，具體涉及一種能消化瓊脂的真菌。

二、背景技術

瓊脂是一種在某些紅藻細胞壁中發現的多聚糖，它的主要化學成分是多聚半乳糖的硫酸脂，包括D-葡萄糖醛酸、L-半乳糖、D-半乳糖、3，6-脫水-L-半乳糖和丙酮酸等。化學結構也可進行修飾成瓊脂糖以供特殊應用。瓊脂加入培養基中很容易就使基質變成固體。早期的生物學家試圖用凝膠固化培養基，但是許多微生物能夠消化它，因為許多微生物能夠分泌蛋白酶，引起了凝膠的液化。而瓊脂化學結構穩定，是一種糖的衍生物，因而不受蛋白酶的影響，不易被菌絲分解利用，在培養基中僅起凝固劑的作用，其在96℃時融化成液體，冷卻到45℃以下即重新凝固。由于用瓊脂配制的固體培養基清晰透明，便于觀察菌絲的形態，故成為常規斜面或平板培養基不可缺少的材料。因此一般認為沒有微生物能夠利用瓊脂。但是現在，這種認識可能會誤導我們，特別是在微生物的定量實驗中。我們在實驗中發現了一株真菌—Cladosporium?cladosporioides?TXJ13021，它能夠消化純瓊脂進行生長。

Cladosporium?cladosporioides是一種分布比較普遍的一種腐生兼寄生的真菌，對該菌的研究主要集中在病原菌(Moore?et?al.，2001.Mycopathologia，154：25-28；Richards?and?Beuchat，2005.International?Journal?of?Food?Microbiology，103：1-10)與金屬生物吸附(Pethkar?et?al.，2001.Bioresource?Technology，80：211-215；Buszman?et?al.，2006.Science?of?the?Total?Environment，363：195-205)等方面。而對于該菌在瓊脂利用方面未見報道。對于該菌的研究可以了解，并非沒有微生物能夠利用與消化瓊脂作為營養源。

三、發明內容

本發明需要解決的問題是利用微生物消化瓊脂，讓研究者了解，并非瓊脂不能夠被微生物所利用與消化，以便于在以后的微生物研究，特別是涉及到瓊脂的微生物定量研究中，提供有用的幫助，同時也為瓊脂的降解提供一定的研究基礎。

本發明采用的真菌是枝狀枝孢菌Cladosporium?cladosporioides?TXJ13021(以下簡稱為TXJ13021菌株)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2007年3月23日，保藏號為CGMCC1987。

本發明的生產菌株TXJ13021菌株分自我國海南尖峰嶺山地雨林的枯落物。分離制備按照常規梯度稀釋法。即將枯落物用水洗脫，然后將洗脫液進行梯度稀釋，將稀釋液接種在固體純瓊脂培養基上，過一段時間將存活在上面的菌進行再培養，獲得菌株。然后為進一步確定菌株是否利用了純瓊脂，將六種常見菌種接于純瓊脂培養基，發現幾乎均未生長，而所獲得的菌株能夠順利生長。

本發明進行了菌落的形態與孢子、菌絲的觀察，生長特點，以及18S?rDNA序列分析，將該菌株鑒定為Cladosporium?cladosporioides的一個新菌株(TXJ13021)。該菌株具有以下特征：①菌落為不規則近圓形，菌落平坦，氣生菌絲不發達，菌落為灰黑色；②菌落在溫度為28℃和pH7.0的條件下生長旺盛；③與其它常見菌相比，菌株能生長在純瓊脂上面，無需加任何其它營養；④18SrDNA序列分析結果在GenBank中進行最大同源性比對，結果發現18S?rDNA的測序結果與Cladosporium?cladosporioides?18S?rDNA序列同源性達到100％。本發明的有益效果是：枝狀枝孢菌Cladosporium?cladosporioidesTXJ13021具有穩定的天然原料來源，菌種來源于枯落物，篩選方法簡單；產品質量穩定，好氧型易保存，對光、溫度、酸堿均有較強的穩定性。枝狀枝孢菌Cladosporium?cladosporioides?TXJ13021能夠消化瓊脂，以降解微生物工業或實驗培養中所產生的瓊脂廢料，糾正了傳統上認為微生物不能消化利用瓊脂的誤區，為瓊脂的微生物定量研究提供有益的幫助。

四、具體實施方式

1.TXJ13021菌株的分離、鑒定