[發(fā)明專利]一種南瓜多糖分離純化的方法及所得組分的用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710017285.X
• 申請日: 2007-01-10
• 公開（公告）號: CN101220100A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 王銳;樊瀛哲;于燁;劉靜
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P3/10;A61P35/02
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司
• 代理人: 馬正良

技術領域

本發(fā)明涉及一種糖類分離純化的方法及所得組分的用途，具體講是采用熱水溶解和乙醇分級沉淀的分離技術從南瓜中分離純化得到南瓜多糖的三種組分及這三種組分的用途。

背景技術

南瓜是葫蘆科植物，果實無毒，是藥食兩用植物。據《滇南本草》記載，南瓜性溫，味甘無毒，入脾、胃二經，能潤肺益氣、化痰排濃、驅蟲解毒、治咳止喘，療肺癰與便泌，并有利尿美容等作用。科學研究實驗證表明：南瓜富含多種氨基酸、多糖、蛋白質、維生素、淀粉、葫蘆巴堿、纖維素、植物油以及部分微量元素。南瓜具有補中益氣，排毒，驅蟲，降低血壓、血脂和膽固醇等功效，特別是對糖尿病有著非常好的療效。近年來，國內外專家對南瓜多糖多有研究，人們通過對多糖的分離和純化使得這一高分子聚合物在生命科學領域的研究有了重大發(fā)展。傳統(tǒng)的南瓜多糖的分離純化技術是將南瓜熱水浸提，水提液用有機溶劑沉淀，沉淀用水溶解后，上清液經透析或膜分離，然后濃縮干燥，粗多糖采用離子交換纖維素柱層析和葡聚糖凝膠等分子篩柱層析對其進行純化得到兩種多糖組分PP-I和PP-II。該技術的不足之處是分離純化步驟復雜，所需分離介質成本較高。另外有研究表明：南瓜多糖有降低糖尿病小鼠的血糖的作用，但其降糖機制尚不清楚，因此南瓜多糖的開發(fā)和用途是一個有待于進一步研究的新課題。

發(fā)明內容

南瓜作為一種藥食兩用植物，資源豐富，價格低廉；作為普通菜肴，受到食用者青睞，作為長效、無毒、降血糖、調血脂藥物或食療劑，具有可進一步開發(fā)利用的價值和研究前景。隨著南瓜多糖在藥理學功效日趨顯現，本發(fā)明的目的旨在提供一種南瓜多糖分離純化的方法。即采用熱水溶解和乙醇分級沉淀的分離純化方法，從南瓜中分離得到南瓜多糖的三種組分：50％乙醇沉淀物，70％乙醇沉淀物和80％乙醇沉淀物。

本發(fā)明的另一目的是提供上述分離純化得到的三種組分50％乙醇沉淀物和70％乙醇沉淀物在防治糖尿病的用途；80％乙醇沉淀物可作為一種潛在的白血病化療藥物的用途。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種南瓜多糖的分離純化方法，其步驟是：

(1)取新鮮成熟的南瓜，去皮，去籽，切片，經0.38％亞硫酸氫鈉溶液浸泡60min后，取出沖洗干凈，添加3倍重量的蒸餾水，在75～80℃水浴上，攪拌提取3次，時間分別為6小時，4小時和4小時，過濾；

(2)將上述所得濾液合并后，離心，取上清液真空濃縮，在濃縮液中加入3倍體積的95％乙醇攪拌均勻，冰箱放置過夜，離心得沉淀物；

(3)取沉淀物以去離子水充分溶解，Sevag法除蛋白：即水溶液中加入1/2體積的氯仿和正丁醇混合液，氯仿∶正丁醇＝4∶1，振蕩使其充分混勻，然后3000rmin^-1的轉速離心15min，除去水溶液與有機溶液交界處的灰白色變性蛋白。水溶液仍按上述方法反復去蛋白，共3次；

(4)水溶液濃縮后，加入95％乙醇，使溶液中乙醇含量為50％，，加入乙醇后靜置過夜，溶液離心，得到沉淀物，沉淀物用95％乙醇，無水乙醇，丙酮依次洗滌，冷凍干燥。得到分離后的南瓜多糖組分50％乙醇沉淀物；上述50％乙醇溶液中再加入95％乙醇，使溶液中乙醇含量為70％，，加入乙醇后靜置過夜，溶液離心，得到沉淀物，沉淀物用95％乙醇，無水乙醇，丙酮依次洗滌，冷凍干燥。得到分離后的南瓜多糖組分70％乙醇沉淀物；上述70％乙醇溶液中再加入95％乙醇，使溶液中乙醇含量為80％，，加入乙醇后靜置過夜，溶液離心，得到沉淀物，沉淀物用95％乙醇，無水乙醇，丙酮依次洗滌，冷凍干燥。得到分離后的南瓜多糖組分80％乙醇沉淀物。

50％乙醇沉淀物：白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑，水溶液為無色透明粘稠狀液體，PH值為6.24，多糖含量為11.9％，茚三酮反應顏色無明顯變化，紫外光譜分析在260nm，280nm處略有吸收，說明含有微量蛋白質和核酸。

70％乙醇沉淀物：淡黃色粉末，易溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑，水溶液為無色透明粘稠狀液體，PH值為6.26，多糖含量為19.7％，茚三酮反應顯紫色，紫外光譜分析在260nm，280nm處有吸收，說明含有少量蛋白質和核酸。

80％乙醇沉淀物：白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑，水溶液為無色透明粘稠狀液體，PH值為6.31，多糖含量為22.5％，茚三酮反應顯紫色，紫外光譜分析在260nm，280nm處有吸收，說明含有少量蛋白質和核酸。