[發明專利]冬蟲夏草人工繁殖方法

無效

• 申請號: 200710016814.4
• 申請日: 2007-07-05
• 公開（公告）號: CN101338277A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發明（設計）人: 姜善清
• 申請（專利權）人: 姜善清
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種無性繁殖方法，特別涉及一種冬蟲夏草人工繁殖方法。

背景技術

自然界生長的冬蟲夏草的生長過程，實際上是蝙蝠蛾幼蟲在進食過程中被作為真菌的被毛孢感染，被毛孢利用蝙蝠蛾幼蟲作營養基生長，直至幼蟲體內蛋白質被消耗殆盡，在幼蟲的頭部形成菌體的集合，稱為子座，頂端產生孢子，成熟后再崩發，再感染，周而復始，完成被毛孢有性繁殖的全部過程。嚴格意義上，冬蟲夏草既不是蟲也不是草，是昆蟲幼蟲與真菌被毛孢的結合體。

完全模仿自然界冬蟲夏草的有性繁殖規律來培養被毛孢，目前在技術上還有相當大的困難，并受生產成本的制約。目前生產領域只有發酵的菌絲體作為冬蟲夏草替代品。而發酵的菌絲體無論在生長形態、細胞組織、活性組分含量還是藥用價值方面與天然冬蟲夏草都有很大的差別。

發明內容

本發明的目的在于克服上述已有技術的不足，而提供一種冬蟲夏草人工繁殖方法，所要解決的技術問題是：利用真菌被毛孢單孢分裂繁殖規律，采用無性繁殖方法培養獲取作為天然冬蟲夏草替代品的被毛孢有性特征的菌體組織。

為了解決上述技術問題，本發明采用了以下技術方案：

一種冬蟲夏草人工繁殖方法，其特征在于：在蒸汽滅菌后的玻璃瓶內用手術刀將菌體組織切碎；接種在玻璃瓶內的培養基表面；在玻璃瓶口蓋上透氣瓶蓋；將蓋有透氣瓶蓋的玻璃瓶放置在養殖區，直至成熟；

其中，培養基及手術刀具的滅菌溫度110～121℃，滅菌時間25～30分鐘；養殖區空氣凈化度30萬級，室內溫度10～18℃，室內濕度RH?40％～55％；

其中，所述的培養基為：每100kg培養基中含有蠶蛹7～9kg，去殼去皮扇貝肉3～5kg，新鮮牛肉1.5～2.5kg，新鮮牛骨4～6kg，花生米0.4～0.6kg，鮮牛奶4～6kg，大豆蛋白胨0.8～1.2kg，瓊脂1.0～1.4kg，磷酸二氫鉀40～60g，硫酸鎂15～25g，余量為水。

環境濕度的控制是本發明的一項關鍵技術，濕度高于RH55％容易滋生霉菌，低于RH40％則導致培養基水分過度揮發。

本發明無性繁殖方法所培養的被毛孢，與自然條件生長的冬蟲夏草以及發酵法制得菌體相比較：(1)、肉眼觀察干品比對：用發酵技術獲得的菌體是灰白色狀態組織，比重較輕。用本發明方法獲得的菌體為圓形，堅硬，表面凸起不平，黃棕色，比重較大，與天然蟲草子座的組織細胞形態基本相同。(2)、經中國中醫研究院中藥研究所檢驗，有效成分含量：本發明菌體＞天然蟲草＞發酵菌絲。經中國科學院微生物研究所檢測，本發明中國被毛孢菌體組織性狀穩定，具備有性繁殖特征。(3)、轉種觀察：將生長到4～5個月左右的被毛孢菌體連瓶倒置于裝有培養基的玻璃瓶上，瓶口與瓶口連接處作無菌處理連接封閉。一個月后，五倍放大鏡觀察，培養基表面分布極少圓點白色的細胞組織，2～3個月培養基表面布滿白色半透明Φ2～3mm圓形，中間凹陷并伴生短絨毛狀、有豎立肉芽狀態細胞組織，隨后生長速度加快。有極少部分會生出1～2枝與天然蟲草子座形態相同假性子座，但長勢較弱，高約20～30mm，粗約Φ2mm，生長時間短，極易倒狀，倒狀后與菌體組織生長在一起，無痕跡，取后曬干后極脆，長至12～13個月后，由白色、半透明狀變成黃色、淺棕色，成熟。與無性繁殖的菌體形態無明顯差別。觀察表明，無性繁殖被毛孢仍具有性繁殖記憶特征。

具體實施方式

下面結合實施例進一步說明本發明。

首先從天然冬蟲夏草中分離出菌體組織，或者取利用本方法繁殖的菌體組織。在滅菌后的玻璃瓶內用手術刀將菌體組織切碎，越細越好。將細碎的菌體組織接種在玻璃瓶內的培養基表面，在玻璃瓶口蓋上透氣瓶蓋；將蓋有透氣瓶蓋的玻璃瓶放置在養殖區，直至成熟。

其中，培養基及手術刀具的滅菌溫度110～121℃，滅菌時間25～30分鐘。培養基滅菌后自然冷卻12小時以上，置放區溫度18℃以下。

養殖區空氣凈化度30萬級，室內溫度10～18℃，室內濕度RH?40％～55％；

接種量為：每瓶20mm³左右。接種瓶為50ml和100ml?PDA培養基兩種裝量。

生長期分為三個階段。第一階段約為30天，五倍放大鏡觀察，在PDA培養基表面與菌種的接觸面縫隙生成乳白色、半透明細胞組織，細胞組織表面伴生有白色短絨毛，局部生長直立、分枝、肉芽狀組織。