[發明專利]檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針及合成方法和用途

無效

• 申請號: 200710016404.X
• 申請日: 2007-07-24
• 公開（公告）號: CN101093222A
• 公開（公告）日: 2007-12-26
• 發明（設計）人: 唐波;邢艷瓏;李平;段霞;卜令海
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/00;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針，其特征在于該熒光探針具有如下結構式：

式中R＝

2、檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針的合成方法，其特征在于該合成方法按如下步驟進行：

a.先將150-200毫克硒氫化鉀溶于10毫升N，N-二甲基甲酰胺中，再于室溫和真空下加入200-250毫克溴代試劑，攪拌，惰性氣體保護下依次加入400-500毫克熒光染料、500-600微升三乙胺及150-190毫克碘化亞銅，反應結束后用乙酸乙酯稀釋，然后分別依次用去離子水、濃度為1摩爾/升的氫氧化鈉溶液洗滌；

b.將a步驟的混合物進行分液，得到的有機相先用無水硫酸鎂干燥，再將經干燥后熒光探針的粗品用洗脫劑過柱，最后旋蒸除去溶劑，干燥得產品。

3、檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針的合成方法，其特征在于該合成方法按如下步驟進行：

a.先向抽真空后通入惰性氣體的容器中加入0.1-0.5克鎂粉，然后緩慢加入2-3毫升溴代試劑和40-60毫升無水乙醚，通入惰性氣體并加入1.2-1.6克黑色硒粉，攪拌，緩慢加入80-100克碎冰，然后滴加10-30毫升濃鹽酸。反應混合物用去離子水洗滌后加入80-100毫升甲醇，氣體鼓泡反應18-24小時，蒸餾得二硒化物；

b.取5-12毫摩爾a步驟的二硒化物溶于5-12毫升二氯甲烷中，在室溫、惰性氣體保護和攪拌下緩慢加入1-2毫升溶有1-1.5克磺酰氯的二氯甲烷溶液，經旋蒸除去溶劑，蒸餾得取代苯次硒酰氯；

c.先向通入惰性氣體的容器中加入0.2-0.6克熒光染料，然后緩慢加入30-50毫升四氯化碳，攪拌溶解，再加入0.1-0.6毫升三乙胺和b步驟的0.1-0.5克取代苯次硒酰氯，攪拌，反應結束后過濾，乙醇重結晶，得產品。

4、根據權利要求2或3所述的檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針的合成方法，其特征在于所述的熒光染料選自羅丹明6G或羅丹明110。

5、根據權利要求2或3所述的檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針的合成方法，其特征在于所述的溴代試劑選自鄰三氟甲基溴苯、間三氟甲基溴苯、對三氟甲基溴苯、2，4-雙三氟甲基溴苯、3，5-雙三氟甲基溴苯或2，4-二硝基溴苯。

6、根據權利要求2所述的檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針的合成方法，其特征在于所述的洗脫劑為二氯甲烷∶四氫呋喃＝2-5∶1或甲醇∶乙酸乙酯＝1∶18-22體積比。

7、根據權利要求2所述的檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針的合成方法，其特征在于所述的旋蒸溫度為35-45℃。

8、權利要求1所述的檢測細胞內谷胱甘肽的熒光探針用于化學體系和生物體系中谷胱甘肽的檢測，生物活細胞和活組織內的谷胱甘肽的熒光成像檢測，以及臨床醫學上病變組織中谷胱甘肽的檢測。