[發明專利]開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法

有效

• 申請號: 200710012314.3
• 申請日: 2007-07-27
• 公開（公告）號: CN101117641A
• 公開（公告）日: 2008-02-06
• 發明（設計）人: 吳文忠;張春枝;徐維鋒;劉明;李代;王素馨;劉毅;王濤;茍東凱
• 申請（專利權）人: 大連醫諾生物有限公司
• 主分類號: C12P19/44
• 分類號: C12P19/44;C12R1/07;C12R1/66;C12R1/85
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司
• 代理人: 畢進

1.一種開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法，包括提取和純化的步驟，其特征在于：提取前對原料進行微生物發酵處理，該步所使用的發酵微生物選自曲霉菌屬霉菌(Aspergillus)、酵母菌屬酵母菌(Saccharomyces)和芽孢桿菌屬細菌(Bacillus)。

2.根據權利要求1所述的開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法，其特征在于該方法包括如下具體步驟：

①以亞麻籽皮或亞麻籽粕為原料，采用低極性溶劑對原料脫脂，該低極性溶劑為石油醚、正己烷或6號溶劑；

②對脫脂后的原料進行微生物發酵處理：所使用的發酵微生物選自曲霉菌屬霉菌(Aspergillus)、酵母菌屬酵母菌(Saccharomyces)和芽孢桿菌屬細菌(Bacillus)，發酵溫度25～37℃，發酵時間24～72h；

③提取：以體積百分比為50～70％的乙醇、甲醇、丙酮或二氧六環溶液為溶劑進行提取，每次提取加入原料體積5～8倍的溶劑，提取次數為2次以上，提取溫度為20～60℃，提取時間為6～36h；

④提取物濃縮、干燥得開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷質量百分含量為8～10％的產品I。

3.根據權利要求1所述的開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法，其特征在于所述的純化步驟包括酶降解→酸沉淀→水洗滌→堿水解→中和→酶降解→干燥的具體操作流程，其中酶降解所用的酶選自果膠酶、纖維素酶、蛋白酶和蝸牛酶。

4.根據權利要求2所述的開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法，其特征在于所述的沉淀用酸選自鹽酸、硫酸和磷酸，水解用堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氧化鈣。

5.根據權利要求3所述的開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法，其特征在于所述的沉淀用酸為磷酸，水解用堿為氫氧化鈣或氧化鈣。

6.根據權利要求3所述的開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的制備方法，其特征在于該方法包括如下具體步驟：

①以亞麻籽皮或亞麻籽粕為原料，采用低極性溶劑對原料脫脂，該低極性溶劑為石油醚、正己烷或6號溶劑；

②對脫脂后的原料進行微生物發酵處理：所使用的發酵微生物選自曲霉菌屬霉菌(Aspergillus)、酵母菌屬酵母菌(Saccharomyces)和芽孢桿菌屬細菌(Bacillus)，發酵溫度25～37℃，發酵時間24～72h；

③提取：以體積百分比為50～70％的乙醇、甲醇、丙酮或二氧六環溶液為溶劑進行提取，每次提取加入原料體積5～8倍的溶劑，提取次數為2次以上，提取溫度為20～60℃，提取時間為6～36h；

④提取物濃縮；

⑤酶降解：所用的酶選自果膠酶、纖維素酶、蛋白酶和蝸牛酶，酶使用量為降解原料質量的0.1～1％，pH＝4～7，溫度為40℃～50℃，反應時間2～4h；

⑥酸沉淀及水洗滌：沉淀用酸選自鹽酸、硫酸和磷酸，pH＝1～3，靜置8～24h后濾餅以水洗滌；

⑦濾餅堿水解：水解用堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氧化鈣，堿用量為水解原料質量的5～20％，水解溫度40℃～70℃，水解2～7h后加酸中和至pH＝6～7；然后過濾，濾餅水洗，采集濾液；

⑧酶降解：上述⑦所得濾液加入酶，所用的酶選自果膠酶、纖維素酶、蛋白酶和蝸牛酶，酶使用量為降解原料質量的0.1～1％，pH＝4～7，溫度為40℃～50℃，反應時間2～4h；

⑨干燥得開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷質量百分含量為20～40％的產品II。

7.一種開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷的分級純化方法，其特征在于該方法包括：

①第一級純化：按照權利要求2的步驟①～④，制得開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷質量百分含量為8～10％的產品I；

②第二級純化：按照權利要求2的步驟①～④操作，所得提取液濃縮后以所得濃縮液為原料進行權利要求6的步驟⑤～⑨操作，制得開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷質量百分含量為20～40％的產品II；

③第三級純化：第二級純化進行到權利要求6所述的步驟⑧，然后將酶解后產物通過大孔樹脂柱層析分離，產物減壓濃縮、干燥得到開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷質量百分含量為50～60％的產品III；

④第四級純化：第三級純化得到的產品再以硅膠柱層析進行分離，洗脫液減壓濃縮、干燥得到開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷質量百分含量90％以上的產品IV。