[發(fā)明專利]一種海參用球形紅假單胞菌的培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710012288.4
• 申請日: 2007-07-27
• 公開（公告）號: CN101353631A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 薛德林;胡江春;王國安;王向陽;張仲良;劉麗;王書錦
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;A01K61/00;C12R1/38
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.一種海參用球形紅假單胞菌的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)菌種活化：將經(jīng)過活化的球形紅假單胞菌斜面菌種接種于液體培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到球形紅假單胞菌種子母液；

2)一級種子培養(yǎng)：將步驟1)中得到的種子母液接種到一級種子培養(yǎng)基中，種子母液與一級種子培養(yǎng)液的重量百分比為20-25∶75-80，經(jīng)培養(yǎng)得到一級種子液；

3)二級擴繁培養(yǎng)：將步驟2)中得到的一級種子液接種到二級擴繁培養(yǎng)基中，一級種子液與擴繁液體培養(yǎng)液的重量百分比為20-25∶75-80，經(jīng)培養(yǎng)得到二級種子液；

4)三級大批量生產(chǎn)性培養(yǎng)：將步驟3)中得到的二級種子液接種到三級大批量生產(chǎn)性培養(yǎng)基中，二級種子液與三級大批量生產(chǎn)性培養(yǎng)液的重量百分比為30-35∶65-70；經(jīng)培養(yǎng)，即得到液體狀，呈粉色、紅色和紫紅色，菌體大小為1.0～1.5μm或1.0～1.1μm，含活菌數(shù)≥20億個/ml的海參用球形紅假單胞菌的菌液；

上述球形紅假單胞菌培養(yǎng)過程所采用的培養(yǎng)基組成均為：氯化銨1.0-3.0g、乙酸鈉2.0-5.0g、硫酸鎂0.2-0.3g、碳酸氫鈉1.0-3.0g、磷酸氫二鉀0.2-0.5g、酵母膏1.0-3.0g、微量元素母液1-3ml、陳海水1000ml，其中含有螯合鐵5-10ppm、PH值自然；

培養(yǎng)條件均為：厭氧、光照1000-10000?Lux、培養(yǎng)6-8天；

所述陳海水為天然海水放置陰涼處儲放1-2周，待雜質(zhì)沉淀后過濾而成，鹽度為2.0-3.0％。

2.按照權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基組成均為，氯化銨1.0g、乙酸鈉3.0g、硫酸鎂0.2g、碳酸氫鈉2.0g、磷酸氫二鉀0.2g、酵母膏1.0g、微量元素母液1ml、陳海水1000ml，其中含有螯合鐵5ppm、PH值自然。

3.按照權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于：所述螯合鐵母液的配制過程為，在500ml去離子水中，加入乙二胺四乙酸二鈉13.1g、硫酸亞鐵12.5g、1個當(dāng)量的氫氧化鉀134ml，在堿性條件下進(jìn)行通氣反應(yīng)，反應(yīng)完全后液體呈棕紅色，將PH值調(diào)至5.5，即為螯合鐵母液；如果每升溶液中加入螯合鐵母液0.2ml，溶液中的螯合鐵濃度為1ppm。

4.按照權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于：所述微量元素母液組成為，硼酸1.40g、硫酸錳0.14g、鉬酸銨0.26g、硫酸鋅0.06g、硫酸銅0.20g、氯化鈷0.01g、去離子水1000ml。

5.按照權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟1)和2)所采用的培養(yǎng)基和培養(yǎng)液經(jīng)高溫高壓滅菌，接種后屬純培養(yǎng)；步驟3)和4)所采用的培養(yǎng)液為化學(xué)滅菌，陳海水采用次氯酸鈉與硫代硫酸鈉中和法處理；陳海水、次氯酸鈉與硫代硫酸鈉的容量與重量比例為：1t∶100ml∶8-10g；具體為：1噸陳海水加入含量為8％的次氯酸鈉100ml，充分反應(yīng)6-8小時后，用8-10g硫代硫酸鈉中和，碘化鉀指示劑反應(yīng)呈無色，再加入其它營養(yǎng)成份就是二級或三級液體培養(yǎng)基。