[發明專利]牛羊無動物源凍精稀釋液及牛羊冷凍精液的制作方法

無效

• 申請號: 200710011389.X
• 申請日: 2007-05-23
• 公開（公告）號: CN101310729A
• 公開（公告）日: 2008-11-26
• 發明（設計）人: 張世偉;宋先忱;劉興偉;韓迪;張文軍;豆興堂;楊文凱
• 申請（專利權）人: 遼寧省遼寧絨山羊育種中心;遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司
• 主分類號: A61K35/52
• 分類號: A61K35/52;A01N1/02
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司
• 代理人: 樊南星

技術領域：

本發明涉及生物與化學科學，特別提供了一種用無動物來源成份配制的牛羊精液稀釋液以及利用此種稀釋液制作牛羊冷凍精液的方法。

背景技術：

現有技術中，動物的各種精液稀釋液的成份組成還沒有擺脫完全離開動物來源成份的發展程度，并且精液稀釋液的保存方法主要還停留在現用現配或冷凍保存的水平。在上述的這種狀態下，必然存在著通過稀釋液中的動物來源成份在動物與人類之間傳播各種疫病的潛在風險。過于簡單的單一的精液稀釋液的保存方法，在很大程度上限制了動物人工授精技術的推廣，增加了配制稀釋液的勞動量，浪費了精液稀釋液，影響了勞動生產率的提高。

因此，人們期望獲得一種用無動物來源成份配制的動物(例如：牛羊)精液稀釋液以及利用此種稀釋液制作動物(例如：牛羊)冷凍精液的方法。

發明內容：

本發明的目的在于從非動物來源成份中篩選出有效物質配制動物的精液稀釋液，杜絕傳統稀釋液傳播疫病的潛在危險；并且改進了傳統的精液稀釋液的保存方法，延長了精液稀釋液的保存時間，簡化了精液稀釋液的使用方法，填補了現有技術在此方面的空白。

本發明所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于：所述稀釋液中至少包含有如下成分之一或其組合：海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白質、氮-三羥甲基氨基乙烷磺酸、十二酰硫酸鈉。

優選方案中，在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合：乳糖、果糖、乙二醇、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺基甲烷；

進一步優選方案：在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合：膽固醇、赤蘚糖醇、醋鉻酸、磷脂酰絲氨酸、大豆異黃酮；

在所述稀釋液中還包含有用于提高解凍后的精子活力、延長精子解凍后存活時間的如下成分之一或其組合：氯前列烯醇、維生素B₁₂、咖啡因、維生素E亞硒酸鈉注射液、蔗糖、磷酸鹽緩沖液、氮-三羥甲基氨基乙烷磺酸(TES)、維生素B1、V_E、PG、乙二胺四乙酸(EDTA)、三羥甲基胺基甲烷(Tris)、磷酸鹽緩沖液(PBS.無無犢牛血清BSA成份)、半胱氨酸、甘露醇、青霉素、鏈霉素。

優選方案中，所述牛羊無動物源凍精稀釋液中所包含的各種成分及其含量可以為(以下所述的各種物質質量/體積為相對質量/體積比例關系)：果糖∶蔗糖∶乳糖∶海藻糖∶乙二胺四乙酸(EDTA)∶三羥甲基胺基甲烷(Tris)∶氮-三羥甲基氨基乙烷磺酸(TES)∶醋酸鉻∶半胱氨酸＝(0.5g～1.4g)∶(1.5g～5g)∶(2g～5g)∶(0.3g～1g)∶(1g～2.5g)∶(1.5g～4g)∶(0.001g～0.002g)∶(0.001g～0.01g)∶(0.01g～0.2g)；

磷酸鹽緩沖液(PBS.無犢牛血清BSA成份)：V_E亞硒酸鈉注射溶液∶磷酸鹽緩沖液∶乙二醇∶丙二醇∶赤薊糖醇∶甘露醇∶膽固醇＝(1ml～3ml)∶(0.1ml～1ml)∶(1ml～6ml)∶(1ml～5ml)∶(1.5ml～7ml)∶(0.1ml～1.5ml)∶(0.1ml～1.5ml)∶(0.1ml～1ml)。

本發明所述牛羊無動物源凍精稀釋液的配制要求具體可以是(以下所述的各種物質質量/體積為相對質量/體積比例關系)：

第一步，用電子天平稱取果糖0.85g、蔗糖3.10g、乳糖3.75g、海藻糖0.58g、乙二胺四乙酸(EDTA)1.80g、三羥甲基胺基甲烷(Tris)2.45g、氮-三羥甲基氨基乙烷磺酸(TES)0.015g、醋酸鉻0.003g、磷酸鹽緩沖液(PBS.無無犢牛血清BSA成份)2.0ml、磷酸鹽緩沖液3.0ml、半胱氨酸0.05g、乙二醇或丙二醇或二者的組合共6.0ml、赤薊糖醇0.50ml、甘露醇0.50ml、膽固醇0.30ml；加入雙蒸餾水3.0ml后將上述物質充分混合，加熱煮沸后立即冷卻，再加入雙蒸餾水，使原有物質保持加熱煮沸前的體積；

第二步，將上述物質充分混勻后，向通過上述過程獲得的混合液中再加入以下物質：磷脂酰絲氨酸2.18g、可溶性大豆蛋白2.00g、大豆卵磷脂0.25g、V_B10.18g、V_B120.09g、咖啡因0.01g、氯前列烯醇0.013g、十二酰硫酸鈉0.50ml、青霉素10萬單位、鏈霉素0.1g；

第三步，將上述物質加入后充分混合，然后放入5℃～10℃的避光環境中靜置20小時以上，取其上清液，棄去容器底部的不溶成份，在溫度為2℃～8℃、排出空氣、避光的條件下密封保存。