[發(fā)明專利]一種檢測(cè)土壤脲酶活性的分析方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710010681.X
• 申請(qǐng)日: 2007-03-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101270386A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 武志杰;雋英華;陳利軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院沈陽(yáng)應(yīng)用生態(tài)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/34
• 分類號(hào): C12Q1/34
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.?一種檢測(cè)土壤中脲酶活性的分析方法，其特征在于：

1)分別稱取n份5-10g過(guò)1-2mm篩的土壤風(fēng)干樣品于n支粗試管中，n≥2，每支試管中分別加入2-4mL甲苯處理10-15分鐘后，向各試管中加入10-40mL?0.5M磷酸鹽緩沖溶液；然后向n-1支試管中加入5-10mL重量濃度10-20％的底物尿素溶液，向另1試管中加入等量的蒸餾水作為樣本對(duì)照；混勻后，塞上不透氣的橡皮塞，將試管放在39-41℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，每24h振蕩一次；同時(shí)作試劑空白對(duì)照，即不加土壤，其余同樣品處理；

2)分別向上述試管中加入5-15mL重量濃度0.5％-1％的氯化亞汞溶液以終止反應(yīng)，并用重量濃度15-18％氯化鉀溶液將試管內(nèi)溶液稀釋至20mL；

3)振蕩30分鐘，用致密濾紙過(guò)濾；

4)用擴(kuò)散法測(cè)定生成的氨量；在Conwey皿的內(nèi)室，注入2mL?0.1NHCI和兩滴萬(wàn)用指示劑，吸取4-6mL的濾液放入皿的外側(cè)，加入5mLK₂CO₃飽和溶液以析出氣態(tài)氮；立即將皿蓋好，仔細(xì)搖蕩后在室溫下放置48h；用0.1N?NaOH回滴過(guò)剩的酸至綠色，以測(cè)的結(jié)合的氨；

5)計(jì)算生成的氨量；

6)計(jì)算脲酶活性：

計(jì)算公式為：x＝[(V₁a-V₂b)*1.4*V₃]*100/(W*T*V₄)

式中：x為脲酶活性(mg?NH₄⁺-N.100g^-1.48h^-1)；V₁為置于皿中內(nèi)室的0.1N?HCI的毫升數(shù)；V₂為用于滴定過(guò)剩酸的0.1N?NaOH的毫升數(shù)；a＝0.99-1.05為0.1N?HCI滴定度的修正值；b＝0.99-1.05為0.1NNaOH滴定度的修正值；1.4為當(dāng)量于1mL?0.1N?HCI的NH₄⁺-N的毫克數(shù)；V₃為反應(yīng)混合物的總體積(mL)；V₄用于分析得濾液體積(mL)；W為稱取土樣重(g)；T為培養(yǎng)的時(shí)間(h)；100為換算為100g的系數(shù)。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于：培養(yǎng)后加入的氯化亞汞溶液，可用重量濃度50％三氯醋酸溶液或者重量濃度0.5％-1％碘化汞代替。