[發明專利]人類免疫缺陷病毒系列蛋白抗體測定方法

有效

• 申請號: 200680055877.4
• 申請日: 2006-09-20
• 公開（公告）號: CN101523216A
• 公開（公告）日: 2009-09-02
• 發明（設計）人: 孫旭東;楊曉林;邵一鳴;邢輝;劉勇;秦莉;吳曉東
• 申請（專利權）人: 北京源德生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K14/155;G01N33/543
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

技術領域

本發明涉及檢測生物樣品中人類免疫缺陷病毒(HIV)存在 情況的方法。更具體的，本發明涉及通過將多種人類免疫缺陷病 毒蛋白抗原相組合檢測生物樣品中人類免疫缺陷病毒蛋白抗體的 存在情況、藉此確定HIV感染存在與否的方法。本發明還涉及用 于此方法中的試劑盒。

背景技術

艾滋病(Human?immunodeficiency?virus，HIV)是人類健康 所面臨的最兇惡的敵人之一，自1981年首次被發現以來，以難以 遏制的速度在全球持續蔓延。據世界衛生組織(WHO)估計，截止 2001年12月底，全球仍存活的HIV感染者/AIDS病例數約4000 萬人，在20年期間已有約2200萬人死于艾滋病。成為排名前四 位的生命殺手，加之感染和死亡者中青壯年比例很大，所以艾滋 病給人類造成的災難已經不亞于世界大戰。

上世紀九十年代以來，艾滋病感染者增長最快的地區已從非 洲轉移到亞洲。我國1985年首次發現傳入病例，1991年在云南 出現第一個HIV感染流行區，至今HIV感染已在所有省市自治 區流行。自1994年我國HIV流行進入快速增長期以來，估計的 HIV感染人數已累計超過64萬并將繼續上升。如不采取有效措 施加以控制，至2010年我國HIV感染者有可能突破1000萬人， 成為全球HIV感染者絕對數最高的國家之一，從而嚴重影響我國 人民的健康、社會的安定和國家的改革開放。

HIV病毒主要有I型和II型，I型HIV病毒(HIV-1)是主 要的感染流行型。我國目前發現的HIV感染者絕大多數為HIV-1 病毒攜帶者，而HIV-2病毒攜帶者較少。其他HIV病毒類型也 有不斷發現。HIV可經血液、性接觸及母嬰途徑傳播。目前對 HIV感染及AIDS尚無有效的治療藥物與疫苗，控制傳染的方法 主要是預防感染，而切斷傳播途徑是最好的預防控制策略，因此， 可靠的低成本高效的HIV檢測方法就顯得尤為重要。

HIV-1感染后，所有感染者血液中均會出現針對HIV-1各結 構蛋白抗原，即由包膜基因(ENV)編碼的gp41、gp120、gp160； 由核殼基因(GAG)編碼的p17、p24、p55及由多聚酶基因(POL) 編碼的P34、P51、P66等全部或大部分的特異性持續性IgG抗體。

血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。HIV感染機 體后，機體將對HIV產生抗體，抗體可持續存在于整個病程中。 因此體內抗體的檢出通常意味著病毒的存在。

對抗體的檢測是目前最常用、最簡便有效的方法。為了使檢 測結果達到盡可能高的準確性，HIV檢測使用特殊的策略，即先 用敏感性高的方法進行初篩，初篩陽性的標本再用特異性強的方 法進行確認。故抗體檢測方法按其目的通常分兩種：初篩檢測和 確認實驗。

1.抗體初篩檢測

初篩檢測的目的是剔除抗體陰性的樣品，并縮小確認范圍。 初篩陰性可認為抗體陰性，即無抗HIV抗體存在，可證明在三周 至三個月前無感染發生。初篩陽性不證明必然感染，需用確認試 劑方可確認是否感染。目前世界上主要的篩檢方法有：①酶聯免 疫吸附實驗(ELISA)；②明膠顆粒凝集實驗(PA)；③乳膠凝集實 驗(LA)；④各種快速檢測法(如：HIV金標快速試紙條)等等。但 以ELISA最為常用，ELISA有很高的靈敏度和特異性，且操作 簡便，適合于大規模篩檢。自1985年第一代ELISA產品問世以 來，國際上已有數十家較知名的公司近100個品種在使用中，國 內也有十多家企業生產HIV?ELISA檢測試劑盒，但品種較單一， 基本上是HIV-1/2型混合抗體的檢測試劑盒，只能檢測血清/血漿 標本。ELISA試劑發展，至今根據抗原或抗體的來源不同及檢測 試劑的類型基本上可劃分為四代產品。

第一代和第二代試劑盒均采用ELISA間接法，即先以混合抗 原(gp41、gp36、gp120和p24)包被酶標板，再加入待檢血清， 最后加入酶標記的抗人IgG抗體。因此只能檢測IgG抗體。由 于方法學和原料等方面的限制，難以保證其檢測靈敏度和特異性 同時保持在較好水平上。第三代試劑則采用雙抗原夾心法，即先 以抗原包被酶標板，再加入待檢血清，最后加入酶標記的抗原， 可同時檢測IgG和IgM抗體。在免疫學原理上，人體的免疫反應 是感染病原后，先出現IgM抗體，再出現IgG抗體。因此與間 接法相比，雙抗原夾心法可縮短檢測上的盲點——窗口期。