[發明專利]可控發酵的方法和步驟

無效

• 申請號: 200680050244.4
• 申請日: 2006-11-07
• 公開（公告）號: CN101351543A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發明（設計）人: 達瑞爾·瑪努塞恩;丹尼斯·博斯克
• 申請（專利權）人: 維文蒂阿生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12M1/36
• 分類號: C12M1/36;C12P1/04
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司
• 代理人: 佟紅巖;王繼長

1.一種在誘導期對發酵系統中的細胞補料進行控制的方法，所述方法 包括：

(a)測定發酵系統中的溶解氧(DO)以及pH水平；

(b)(i)當pH值低于pH-stat調定點時提高DO-stat調定點或(ii)當 pH值高于pH-stat調定點時降低DO-stat調定點；以及

(c)當DO水平高于DO-stat調定點時對細胞提供營養補料。

2.權利要求1的方法，其中DO-stat調定點通過如下方法確定，該方 法包括：

(1)將細胞和培養基添加到發酵系統中；

(2)測定在生長期內溶解氧(DO)以及pH水平；

(3)當DO水平升高和/或pH水平升高時向系統內加入營養補料； 以及

(4)當DO水平降低時停止加入營養補料，其中DO-stat調定點是 將一個預設值與生長期內測得的最低DO值相加后確定。

3.權利要求2的方法，其中當DO水平升高≥10％和/或pH水平升 高≥0.1單位時，在步驟(3)中加入營養補料。

4.權利要求2或3的方法，其中當DO水平達到預設值時，在步驟3) 之前增加發酵系統中的攪拌器速率以及氣流水平。

5.權利要求4的方法，其中增加攪拌器速率以及氣流至最大值并在剩 余的發酵過程中保持在該最大值。

6.權利要求2～5中任一項的方法，其中DO-stat調定點是將5％～20％ 與生長期內測得的最低DO水平相加得到。

7.權利要求2～5中任一項的方法，其中DO-stat調定點是將5％～15％ 與生長期內的最低DO水平相加得到。

8.權利要求2～5中任一項的方法，其中DO-stat調定點是將10％與生 長期內的最低DO水平相加得到。

9.權利要求1～5中任一項的方法，其中pH-stat調定點為7.0～7.5。

10.權利要求6的方法，其中pH-stat調定點為7.1～7.3。

11.權利要求1～7中任一項的方法，其中細胞為大腸桿菌。

12.權利要求1～8中任一項的方法，其中在步驟(b)中，當pH降 低≥0.02pH單位時，增加DO-stat調定點約2％或當pH增加≥0.02pH 單位時，降低DO-stat調定點約2％。

13.權利要求1～9中任一項的方法，其中發酵方式為補料-分批發 酵。

14.權利要求1～10中任一項的方法，其中營養補料含有葡萄糖、 甘油、其它的碳水化合物以及其它含有這些糖類中的一種或其組合的營養 溶液。

15.一種用于控制發酵系統中的細胞補料的自動化方法，該發酵系 統包括發酵罐、pH探測器、溶解氧(DO)探測器、補料泵以及控制DO-stat 調定點以及補料泵的可編程控制器，其中該方法包括：

(1)使用pH探測器測定發酵罐中的pH，并且i)如果pH升高超 過pH-stat調定點時，則降低DO-stat調定點或ii)如果pH降 低低于pH-stat調定點時，則升高DO-stat調定點；以及

(2)使用DO探測器測定發酵罐中的DO水平，并且當DO水平高 于DO-stat調定點時使用補料泵添加營養補料。

16.權利要求12中的自動化方法，其中在步驟(1)中，當pH降低 ≥0.02pH單位時增加DO-stat調定點約2％，或者當pH增加≥0.02pH 單位時降低DO-stat調定點約2％。