[發(fā)明專利]確定中胚層、內(nèi)胚層和中內(nèi)胚層細(xì)胞命運(yùn)的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680048455.4 | 申請日： | 2006-10-25 |
| 公開（公告）號： | CN101365784A | 公開（公告）日： | 2009-02-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 曼吉利·巴克里;勞倫斯·W·斯坦頓 | 申請（專利權(quán)）人： | 科學(xué)技術(shù)研究公司 |
| 主分類號： | C12N5/06 | 分類號： | C12N5/06;C07K14/475;A61K38/17 |
| 代理公司： | 隆天國際知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 吳小瑛;劉春生 |
| 地址： | 新加坡*** | 國省代碼： | 新加坡;SG |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 確定 中胚層 胚層 細(xì)胞 命運(yùn) 方法 | ||
1.從多能干細(xì)胞產(chǎn)生中胚層或者內(nèi)胚層細(xì)胞的方法，所述方法包括 激活多能干細(xì)胞中的Wnt信號通路。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在Wnt信號通路激活的至少一 部分時間內(nèi)，多能干細(xì)胞為基本上二維的構(gòu)型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中在Wnt信號通路激活的基 本上全部時間內(nèi)，所述多能干細(xì)胞為基本上二維的構(gòu)型。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其中所述二維構(gòu)型是單細(xì)胞層。
5.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，Wnt信號通路激活至少4天， 例如至少10天。
6.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述多能干細(xì)胞包括胚 胎干細(xì)胞，例如人類胚胎干細(xì)胞。
7.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述中胚層或者內(nèi)胚層 細(xì)胞包括中胚層祖細(xì)胞或者內(nèi)胚層祖細(xì)胞。
8.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述中胚層或者內(nèi)胚層 細(xì)胞是專能的、雙能的或者單能的。
9.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其還包括使所述中胚層或者 內(nèi)胚層細(xì)胞終末分化的步驟。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述步驟包括使中胚層或者 內(nèi)胚層細(xì)胞暴露于生長因子或者激素。
11.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述多能干細(xì)胞Wnt 信號通路的激活導(dǎo)致所述多能干細(xì)胞向中胚層或者內(nèi)胚層途徑進(jìn)行分 化。
12.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述多能干細(xì)胞Wnt 信號通路的激活導(dǎo)致所述多能干細(xì)胞向中胚層或者內(nèi)胚層細(xì)胞分化。
13.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述中胚層細(xì)胞表達(dá) 選自下組中的中胚層標(biāo)記：T-brachyury、Runx1和Pitx2。
14.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá) 選自下組中的內(nèi)胚層標(biāo)記：Gata4、Foxa2、Sox17、AFP和MixL1。
15.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述多能干細(xì)胞Wnt 信號通路的激活導(dǎo)致中內(nèi)胚層細(xì)胞的產(chǎn)生。
16.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述中內(nèi)胚層細(xì)胞表 達(dá)內(nèi)胚層標(biāo)記和中胚層標(biāo)記。
17.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法不導(dǎo)致外胚 層細(xì)胞的產(chǎn)生。
18.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括激活卷 曲蛋白(Fz)受體來激活Wnt信號通路。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述方法包括使所述多能干 細(xì)胞暴露于能夠結(jié)合并且激活卷曲蛋白(Fz)受體的Wnt配體或其變異體。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述Wnt配體包括 Wnt3A(Mouse?Genome?Informatics?MGI?ID?98956)。
21.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括減少多 能干細(xì)胞中糖原合成酶激酶(EC?number2.7.1.37.GSK蛋白激酶(GSK-3)) 的活性來激活Wnt信號通路。
22.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述GSK包括GSK-3β (NCBI?GeneID?433548)。
23.根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的方法，其中通過使多能干細(xì)胞暴 露于GSK-3β的化學(xué)抑制劑來減少所述糖原合成酶激酶的活性。
24.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述化學(xué)抑制劑包括 能夠減少GSK活性的iGSK-3β或者BIO、或其變異體。
25.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括增加多 能干細(xì)胞中β-連環(huán)蛋白的活性來激活Wnt信號通路。
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