[發明專利]核重新編程因子

有效

• 申請號: 200680048227.7
• 申請日: 2006-12-06
• 公開（公告）號: CN101356270A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 山中伸彌
• 申請（專利權）人: 國立大學法人京都大學
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C07K14/47;C12N5/06
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

技術領域

本發明涉及具有使分化的體細胞重新編程來誘導誘導式多能性干細胞的作用的核重新編程因子(nuclear?reprogramming?factor)。?

背景技術

胚胎干細胞(ES細胞)是由人和小鼠的初期胚建立的干細胞，具有能長期進行培養并維持可以分化成存在于生物體中的所有類型細胞的多能性的特征。人們期待利用該性質將人ES細胞作為針對帕金森病、青少年糖尿病、白血病等多種疾病的細胞移植療法的來源。但是，存在著ES細胞的移植與臟器移植同樣會引起排斥反應這樣的問題。而且，對于通過破壞人胚胎建立的ES細胞的利用，出于倫理的觀點的反對意見也很多。如果能夠誘導患者自身的分化體細胞脫分化，建立具有接近于ES細胞的多能性和增殖能力的細胞(該細胞在本說明書中被稱為“誘導式多能性干細胞”(iPS細胞)，但也存在被稱為“胚胎干細胞樣細胞”或“ES樣細胞”的情況)的話，則預期能夠利用它們作為沒有排斥反應和倫理性問題的理想的多能性細胞。?

作為使體細胞核重新編程的方法，已報道了，例如，從將體細胞的核移植到卵細胞中制備的克隆胚中建立ES細胞的技術(W.S.Hwang等，Science，303，pp.1669-74，2004；W.S.Hwang等，Science，308，pp.1777-83，2005：但是，現已清楚了這些論文都是捏造的，而且已于日后撤下這些論文)。然而，這些技術只是為了建立ES細胞的目的而制備克隆胚，因此與使用不孕治療中產生的剩余胚的常規ES細胞相比，倫理的問題反而大。而且，現已報道了通過使體細胞與ES細胞相融合使體細胞核重新編程的技術(M.Tada等，Curr.Biol.，11，pp.1553-1558，2001；C.A.Cowan等，Science，309，pp.1369-73，2005)。但是，即使在該方法中也存在以下問題：無法解?決由于導致最終使用人ES細胞而產生的倫理性問題。而且，現已報道了使生長于人中的生殖細胞腫瘤來源的細胞株的提取物和分化細胞反應而使細胞核重新編程的技術(C.K.Taranger等，Mol.Biol.Cell，16，pp.5719-35，2005)。該方法，提取物中何種成分誘導重新編程完全不清楚，因此在技術的可靠性和安全性上存在問題。?

另一方面，提出了篩選具有使分化的體細胞重新編程來誘導誘導式多能性干細胞的作用的核重新編程因子的方法(國際公開WO2005/80598)。該方法包括以下步驟：使含有在受ECAT(ES?cellassociated?transcript)基因(ES細胞中特異性表達的基因群：ES細胞相關轉錄物)的表達調節區域的表達調節位置上存在標記基因的基因的體細胞與被檢物質相接觸、研究標記基因表達細胞的出現的有無，選擇使該細胞出現的被檢物質作為體細胞的核重新編程因子的候選物。而且，該出版物的實施例6等中公開了使體細胞重新編程的方法。但是，上述出版物中沒有公開實際上鑒定核重新編程因子的報告。?

專利文獻1國際公開WO?2005/80598?

發明內容

本發明的課題在于提供核重新編程因子。更具體的是，本發明的課題在于提供用于不利用卵細胞、胚和ES細胞而誘導分化細胞的重新編程，簡便且再現性強地建立具有與ES細胞同樣的多能性和增殖能力的誘導式多能性干細胞的方法。?

本發明者為了解決上述的課題進行了積極的研究，使用國際公開WO?2005/80598中記載的核重新編程因子的篩選方法嘗試鑒定核重新編程因子。其結果是，發現了24種候選作為與核重新編程相關的基因，確認了它們中的3種基因是核重新編程所必需的基因。本發明是基于上述發現而完成的。?

也就是，根據本發明，提供了一種體細胞的核重新編程因子，其含有下述3種基因：Oct家族基因、Klf家族基因和Myc家族基因的各基因的產物。根據本發明的優選方式，提供了含有下述3種基因：?Oct3/4、Klf4和c-Myc的各基因的產物的上述因子。?

而且，根據其它的優選方式還提供了還含有下述基因：Sox家族基因的基因產物的上述因子，作為更優選的方式，提供了含有Sox2的基因產物的上述因子。?

而且，如果根據其它的優選方式，提供了含有細胞因子，該細胞因子和Myc家族基因的基因產物共同存在、或代替Myc家族基因的基因產物。作為更優選方式，提供了細胞因子為堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和/或干細胞因子(SCF)的上述因子。?