[發明專利]新植物病毒顆粒及其滅活方法

無效

• 申請號: 200680045205.5
• 申請日: 2006-12-01
• 公開（公告）號: CN101495137A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: L·拉索霍娃;J·P·費爾普斯
• 申請（專利權）人: 陶氏環球技術公司
• 主分類號: A61K39/07
• 分類號: A61K39/07;C12N7/06
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司
• 代理人: 程 偉

1、滅活植物病毒的方法，包括：

pH值大于8.0時，向表達病毒樣顆粒的植物材料給予硫酸銨，其中，植物材料選自植物、植物組織、植物細胞或原生質體；

孵育植物材料至少十個小時以生產滅活病毒樣顆粒；和

從植物材料收獲滅活病毒樣顆粒。

2、根據權利要求1所述的方法，進一步包括至少一條整合入病毒的外源肽。

3、根據權利要求1所述的方法，其中所述的病毒是非包膜RNA病毒。

4、根據權利要求1所述的方法，其中所述的滅活病毒樣顆粒提呈異源生物活性肽。

5、根據權利要求1所述的方法，其中所述的肽是抗原。

6、根據權利要求1所述的方法，其中所述的肽是表位。

7、根據權利要求1所述的方法，其中以0.5M到1.0M濃度給予硫酸銨。

8、根據權利要求1所述的方法，其中pH是9.0。

9、根據權利要求1的方法，其中在10℃到40℃間孵育植物材料。

10、根據權利要求2所述的方法，其中所述的方法包括在pH7的0.7M(NH₄)₂SO₄中將植物病毒結合到疏水相互作用色譜柱上、用pH9的0.7M(NH₄)₂SO₄洗滌結合的病毒，并用pH9的0.7M(NH₄)₂SO₄洗脫所述病毒。

11、根據權利要求1所述的方法，其中該病毒具有二十面體的衣殼。

12、根據權利要求1所述的方法，其中該病毒是來自選自雀麥花葉病毒科、豇豆花葉病毒科或番茄叢矮病毒科的科的病毒。

13、根據權利要求1所述的方法，其中病毒是來自選自雀麥花葉病毒組、豇豆花葉病毒組、番茄叢矮病毒組、苜蓿花葉病毒組或南方菜豆花葉病毒組的屬的病毒。

14、根據權利要求1所述的方法，其中病毒選自豇豆花葉病毒、豇豆褪綠斑駁病毒、番茄叢矮病毒、苜蓿花葉病毒、雀麥草花葉病毒或南方菜豆花葉病毒。

15、根據權利要求1所述的方法，其中病毒包括衣殼蛋白，且肽是融合到衣殼蛋白的抗原。

16、根據權利要求1所述的方法，其中肽選自肽類激素、酶、生長因子、抗體、免疫調節劑或細胞因子。

17、根據權利要求3所述的方法，其中所述方法進一步包括將病毒RNA序列轉變成全長cDNA轉錄物、將所述cDNA克隆入載體和通過在能容忍這樣的插入而沒有瓦解RNA復制、顆粒形成或感染性的區域內插入外源DNA片段修飾所述cDNA。

18、根據權利要求1所述的方法，其中整合入病毒的外源肽選自流感病毒亞基、東方馬腦炎病毒、犬細小病毒或炭疽桿菌。

19、生產非感染性病毒樣顆粒的方法，包括：

pH值大于8.0時，向選自植物、植物組織、植物細胞或原生質體且缺少至少一部分存在于植物病毒內的RNA的植物材料給予硫酸銨；

孵育植物材料至少十個小時；和

從植物材料收獲滅活病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆粒不能復制。

20、含有病毒樣顆粒的疫苗，其中所述疫苗包括植物病毒，而所述植物病毒包括至少一種整合入該病毒的外源肽，pH值大于8.0時，采用包括向，選自植物、植物組織、植物細胞或原生質體的植物材料給予硫酸銨，生產滅活病毒樣顆粒；孵育植物材料至少十個小時；和從植物材料收獲滅活病毒樣顆粒的方法生產疫苗。

21、根據權利要求20所述的疫苗，其中當將所述病毒樣顆粒給予哺乳動物時提呈的VLP肽誘導免疫反應。

22、根據權利要求20所述的疫苗，其中疫苗是為了流感病毒、東方馬腦炎病毒、犬細小病毒或炭疽桿菌。

23、根據權利要求20所述的疫苗，其中肽是表位。

24、根據權利要求23所述的疫苗，其中表位是病毒病原體、細菌病原體或癌癥。