[發明專利]用于研究動脈粥樣硬化損害的動物模型

無效

• 申請號: 200680041317.3
• 申請日: 2006-09-07
• 公開（公告）號: CN101517407A
• 公開（公告）日: 2009-08-26
• 發明（設計）人: X·江;M·R·霍亞蒂
• 申請（專利權）人: 紐約州州立大學研究基金會
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00;A01K67/027;A61K38/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉 冬;劉 玥

本發明涉及動物模型、基因和生物化學/生物醫學技術，特別是用 于研究動脈粥樣硬化的動物模型。本發明也涉及篩選治療動脈粥樣硬 化藥物的方法和用于預防和/或治療動脈粥樣硬化的方法。更具體地 講，本發明涉及通過給予有需要的受試者絲氨酸棕櫚酰-CoA轉移酶 (SPT)或其亞單位的抑制劑，預防和/或治療動脈粥樣硬化的方法。

發明背景

絲氨酸棕櫚酰-CoA轉移酶(SPT)為在神經鞘脂生物合成中的限速 酶(1)。很長時間已知SPT在神經鞘脂的代謝中扮演重要的角色。另外， 在大鼠肝臟(2)和肺(3)中的SPT活性與在那些組織中的神經鞘脂形成 正相關。飼養高膽固醇飼料提高在兔大動脈中的SPT活性(4)。也已發 現SPT活性的降低與代謝綜合征或胰島素抗性、肥胖和糖尿病有關 (Summer等，Diabetes，54：591-602，2005)。

已經克隆酵母SPT的兩個候選cDNA：末端LCB1和LCB2(5，6)，翻 譯的序列顯示它們的基因產物具有21％氨基酸序列同一性(6)。在缺少 LCB1或LCB2的酵母菌株中SPT活性的缺乏，與蛋白質相似性數據一 起表明SPT的兩個基因編碼亞單位(6)。也已克隆編碼小鼠和人的LCB1 和LCB2的同系物(SPTLC1和SPTLC2)的基因(Sptlc1和Sptlc2)(7，8)。在 小鼠中，兩個mRNA具有相同的組織分布，在所有組織中兩個轉錄物 量的比率大約保持恒定(8)。Sptlc2?mRNA的組織分布與SPT活性的分 布平行(9)。

已顯示哺乳動物的SPT為53-kDa?Sptlc1亞單位和63-kDa?Sptlc2亞 單位的異源二聚體(8、10和19)，該兩個亞單位結合到內質網(ER)(11)。 Sptlc2似乎是不穩定的，除非它和Sptlc1締合(11)。在轉錄時和轉錄后 可調節SPT的活性，已表明它的上調在由某類應力誘導的凋亡中起作 用(12)。在人類Sptlc1基因中的特定錯義變異導致I型遺傳性感覺神經 病，該病為常染色體顯性的遺傳病，這些變異賦予在SPT活性方面的 顯性失活效應(13，14)。也有一些體外的和離體的證據表明Sptlc1和 Sptlc2為SPT的兩個亞單位，處理兩個基因將影響神經鞘脂的代謝 (11-14)。

然而，盡管迄今為止對SPT的所有研究，但沒有保留SPT功能或 用于研究這樣的功能的動物模型的直接的體內證據。本發明已經首次 成功地生產Sptlc1或Sptlc2基因缺乏的動物，該動物可用于評價Sptlc1 或Sptlc2與SPT活性之間的關系，和Sptlc1或Sptlc2缺乏與SPT的體內作 用例如神經鞘脂代謝之間的關系。

(Isaria?sinclairii)為在傳統上用于中藥試圖達到永遠年輕的真菌 (JBC?10)。已從(I.sinclairii)分離稱為多球殼素的特異性SPT抑制劑 (JBC?10)，多球殼素的特征為具有與鞘氨醇相似的分子結構(JBC?11)。 使用多球殼素-基親合色譜，可從白介素-2-依賴性小鼠細胞毒性T細胞 系(CTLL-2)純化兩種蛋白質LCB1和LCB2(JBC?12)。該結果表明LCB1 和LCB2為多球殼素結合蛋白，并證實該事實：它們負責SPT的活性 (JBC?12)。

發明概述

本發明提供具有至少一個編碼絲氨酸棕櫚酰-CoA轉移酶(SPT)亞 單位(Sptlc1或Sptlc2)的內源基因的雜合分裂的動物，優選嚙齒動物， 更優選小鼠。本發明認為Sptlc1和Sptlc2負責SPT活性，缺乏Sptlc1或 Sptlc2的同型結合導致胚胎的致死率，缺乏Sptlc1或Sptlc2基因的雜合 導致血漿神經鞘脂包括神經酰胺(Cer)和鞘氨醇-1-磷酸酯(S1P)水平的 顯著變化，這可導致抗動脈粥樣硬化效應。因此和依照本發明，抑制 Sptlc1和/Sptlc2可為動脈粥樣硬化的替代治療。

因此，本發明的一個方面涉及其基因組包含至少一個編碼絲氨酸 棕櫚酰-CoA轉移酶(SPT)亞單位的內源基因的雜合分裂的轉基因剔除 動物，優選嚙齒動物，更優選小鼠。