[發(fā)明專利]植物的同源重組

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680041296.5
• 申請日: 2006-09-06
• 公開（公告）號: CN101300349A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: P·E·威蒂克;F·G·P·休斯?fàn)?/a>;C·海汀;H·H·奧芬柏格;I·M·布魯吉曼
• 申請（專利權(quán)）人: 關(guān)鍵基因公司
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01
• 代理公司: 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 張廣育;姜建成

1.一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述轉(zhuǎn)基因植物與非轉(zhuǎn)基因植物 相比，其染色體上減數(shù)分裂同源重組頻率升高和/或減數(shù)分裂同源重組事 件的位置改變，所述方法包括下列步驟：

(a)使用編碼MLH1蛋白的核苷酸序列對植物或植物細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn) 化，所述MLH1蛋白包括與SEQ?ID?NO：3的至少70％的氨基酸序列同 一性，所述核苷酸序列與在植物細(xì)胞中具有活性的啟動子有效連接，以 及

(b)再生一種植物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述核苷酸序列整合到所述植物 的基因組中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，進(jìn)一步包括步驟

(c)使用所述植物產(chǎn)生另一種植物或一群植物，并且任選地，從 所述一群植物中選擇一種或多種植物。

4.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的方法，其中所述的減數(shù)分裂同源重 組頻率升高是減數(shù)分裂干擾交換頻率升高。

5.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的方法，其中所述的減數(shù)分裂同源重 組頻率與非轉(zhuǎn)基因植物相比升高至少10％。

6.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的方法，其中所述的啟動子為減數(shù)分 裂偏向性或減數(shù)分裂特異性啟動子，或者為誘導(dǎo)型啟動子。

7.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的方法，其中編碼所述MLH1蛋白的 核苷酸序列的密碼子選擇已被改變得適合于轉(zhuǎn)化的植物屬或植物種的密 碼子選擇。

8.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的方法，其中在細(xì)胞學(xué)分析中，優(yōu)選 在權(quán)利要求11-15的分析中，使用抗MLH1抗體對所述植物的一條或 多條染色體上的減數(shù)分裂同源重組頻率和/或減數(shù)分裂同源重組事件的 位置進(jìn)行評估。

9.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的方法，其中所述植物屬于茄科 (Solanaceae)，優(yōu)選屬于茄屬(Solanum)。

10.一種轉(zhuǎn)化的植物或植物種子，或者一種轉(zhuǎn)化的植物的細(xì)胞，或 者一群轉(zhuǎn)化的植物或種子，它們可通過權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法獲 得。

11.一種抗MLH1抗體在細(xì)胞學(xué)分析中用于測定植物細(xì)胞中干擾 性減數(shù)分裂同源重組事件的頻率的用途，所述方法包括：

(a)制備減數(shù)分裂粗線期細(xì)胞的樣本，

(b)使所述樣本接觸至少一種抗MLH1抗體，任選地接觸可標(biāo)記 聯(lián)會復(fù)合體的軸向元件的抗體和/或可標(biāo)記著絲粒區(qū)的抗體，任選地，使 用DAPI對染色體DNA進(jìn)行復(fù)染，以及

(c)測定每個(gè)細(xì)胞中標(biāo)記的MLH1焦點(diǎn)的數(shù)目，優(yōu)選使用光學(xué)顯 微鏡或電子顯微鏡。

12.一種抗MLH1抗體在細(xì)胞學(xué)分析中用于測定植物細(xì)胞中干擾 性減數(shù)分裂同源重組事件的位置和分布的用途，所述方法包括：

(a)制備一種減數(shù)分裂粗線期細(xì)胞的樣本，

(b)使所述樣本同時(shí)或先后接觸至少一種抗MLH1抗體、一種可 標(biāo)記聯(lián)會復(fù)合體的軸向元件的抗體和一種可標(biāo)記著絲粒區(qū)的抗體，任選 地，使用DAPI對染色體DNA進(jìn)行復(fù)染，以及

(c)測定每個(gè)細(xì)胞中標(biāo)記的MLH1焦點(diǎn)的數(shù)目，優(yōu)選使用光學(xué)顯 微鏡或電子顯微鏡。

13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的用途，其中所述的可標(biāo)記聯(lián)會復(fù)合體 的軸向元件的抗體為抗SMC1或抗SMC3抗體，并且所述的其中可標(biāo)記 著絲粒區(qū)的抗體為抗CENP-C抗體。

14.根據(jù)權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)的用途，其中所述的抗MLH1抗 體由SEQ?ID?NO：3的至少5個(gè)連續(xù)的氨基酸所誘導(dǎo)產(chǎn)生，或者由與SEQ ID?NO：3具有至少50％序列同一性的序列的至少5個(gè)連續(xù)的氨基酸所誘 導(dǎo)產(chǎn)生。

15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的用途，其中所述的抗MLH1抗體、所 述的抗SMC1抗體、所述的抗SMC3抗體和所述的抗CENP-C抗體分別 由SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO?6和SEQ?ID?NO：8所誘導(dǎo)產(chǎn)生，或者由 這些序列的片段所誘導(dǎo)產(chǎn)生，所述片段包含至少5個(gè)連續(xù)的氨基酸。