[發(fā)明專利]TRPM5離子通道的高通量篩選實(shí)驗(yàn)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680040908.9
• 申請(qǐng)日: 2006-11-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101300489A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·W·布賴恩特;S·P·李;R·K·帕爾默;楊起風(fēng);M·N·T·布伯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 紅點(diǎn)生物公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N33/567
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 羅菊華

1.篩選TRPM5離子通道的潛在增強(qiáng)劑的高通量篩選實(shí)驗(yàn)，其包 含：

(a)使表達(dá)TRPM5的細(xì)胞接觸亞適濃度的增加細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的 試劑，其中所述細(xì)胞已經(jīng)預(yù)裝載膜電勢(shì)熒光染料；

(b)使所述細(xì)胞接觸電勢(shì)增強(qiáng)化合物；

(c)使用光學(xué)檢測(cè)器，測(cè)量在有所述電勢(shì)增強(qiáng)化合物存在下所述 細(xì)胞的熒光強(qiáng)度；和

(d)對(duì)比測(cè)得的熒光強(qiáng)度和在有最適濃度的增加細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的 試劑存在下不同表達(dá)TRPM5的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。

2.權(quán)利要求1的實(shí)驗(yàn)，其還包含選擇一種或多種增強(qiáng)TRPM5活 性的實(shí)驗(yàn)化合物。

3.權(quán)利要求1的實(shí)驗(yàn)，其中所述細(xì)胞位于多孔管中。

4.權(quán)利要求3的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含高達(dá)96個(gè)孔。

5.權(quán)利要求3的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含大于96個(gè)孔。

6.權(quán)利要求3的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含384個(gè)孔。

7.權(quán)利要求3的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含1536個(gè)孔。

8.權(quán)利要求1的實(shí)驗(yàn)，其中所述增加鈣濃度的試劑選自：凝血酶， 三磷酸腺苷(ATP)，卡巴膽堿，鈣離子載體，和內(nèi)源G蛋白偶聯(lián)受體 分子的激動(dòng)劑。

9.權(quán)利要求8的實(shí)驗(yàn)，其中所述試劑是凝血酶。

10.權(quán)利要求8的實(shí)驗(yàn)，其中所述試劑是ATP。

11.權(quán)利要求8的實(shí)驗(yàn)，其中所述試劑是卡巴膽堿。

12.權(quán)利要求1的實(shí)驗(yàn)，其中所述膜電勢(shì)熒光染料是熒光顯像平 板讀數(shù)器膜電勢(shì)(FMP)染料。

13.權(quán)利要求1的實(shí)驗(yàn)，其中所述光學(xué)檢測(cè)器選自：熒光顯像平 板讀數(shù)器FLEXStation，電壓/離子探針讀數(shù)器(VIPR)，熒 光顯微鏡和電荷耦合裝置(CCD)照相機(jī)，和Pathway?HT。

14.權(quán)利要求13的實(shí)驗(yàn)，其中所述光學(xué)檢測(cè)器是

15.測(cè)定實(shí)驗(yàn)化合物是否是TRPM5離子通道-特異性調(diào)控劑的高 通量篩選實(shí)驗(yàn)，其包含：

(a)在有氯化鉀存在下，使表達(dá)TRPM5且已經(jīng)預(yù)裝載膜電勢(shì)熒光染 料的細(xì)胞接觸實(shí)驗(yàn)化合物；

(b)使用光學(xué)檢測(cè)器，測(cè)量在有所述電勢(shì)調(diào)控化合物存在下所述細(xì) 胞的熒光強(qiáng)度；

(c)對(duì)比在步驟(b)中測(cè)得的熒光強(qiáng)度和在有氯化鉀存在且沒(méi)有實(shí) 驗(yàn)化合物存在下不同表達(dá)TRPM5且已經(jīng)預(yù)裝載膜電勢(shì)染料的細(xì)胞的熒 光強(qiáng)度；和

(d)通過(guò)測(cè)定有氯化鉀和實(shí)驗(yàn)化合物存在下熒光強(qiáng)度與有氯化鉀、 沒(méi)有實(shí)驗(yàn)化合物存在下熒光強(qiáng)度的比是小于還是大于1，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)化 合物是否是TRPM5-特異性調(diào)控劑。

16.權(quán)利要求15的實(shí)驗(yàn)，其還包含選擇增強(qiáng)TRPM5活性的實(shí)驗(yàn) 化合物。

17.權(quán)利要求15的實(shí)驗(yàn)，其還包含選擇抑制TRPM5活性的實(shí)驗(yàn) 化合物。

18.權(quán)利要求15的實(shí)驗(yàn)，其中所述細(xì)胞位于多孔管中。

19.權(quán)利要求18的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含高達(dá)96個(gè)孔。

20.權(quán)利要求18的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含大于96個(gè)孔。

21.權(quán)利要求18的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含384個(gè)孔。

22.權(quán)利要求18的實(shí)驗(yàn)，其中所述多孔管包含1536個(gè)孔。

23.權(quán)利要求15的實(shí)驗(yàn)，其中所述增加鈣濃度的試劑選自：凝血 酶，三磷酸腺苷(ATP)，卡巴膽堿，鈣離子載體，和內(nèi)源G蛋白偶聯(lián)受 體分子的激動(dòng)劑。

24.權(quán)利要求23的實(shí)驗(yàn)，其中所述試劑是凝血酶。

25.權(quán)利要求23的實(shí)驗(yàn)，其中所述試劑是ATP。

26.權(quán)利要求23的實(shí)驗(yàn)，其中所述試劑是卡巴膽堿。