[發(fā)明專利]具有β－葡糖苷酶活性的多肽和編碼該多肽的多核苷酸無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200680037147.1 | 申請(qǐng)日： | 2006-08-04 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN101287751A | 公開（公告）日： | 2008-10-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 克里斯琴·克羅;保羅·哈里斯 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 諾維信股份有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K14/385 | 分類號(hào)： | C07K14/385;C12N9/42;C12N15/56;C11D3/386;C12P19/02;C13K1/02;C12N15/62 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 | 代理人： | 封新琴;巫肖南 |
| 地址： | 美國(guó)加利*** | 國(guó)省代碼： | 美國(guó);US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 具有 葡糖 活性 多肽 編碼 多核苷酸 | ||
1.具有β-葡糖苷酶活性的分離的多肽，其選自下組：
(a)多肽，其包含與SEQ?ID?NO：2的成熟多肽具有至少70％同一性的氨基酸序列；
(b)多肽，其由在至少中嚴(yán)緊條件下與以下序列雜交的多核苷酸編碼：(i)SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列，(ii)SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列中包含的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的互補(bǔ)鏈；
(c)多肽，其包含A-E-[ST]-[IV]-[KR]-G-[IM]-Q-[DS]-[ST]-G-V-[IV]-A；和
(d)變體，其包含保守取代、缺失和/或插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸的SEQ?IDNO：2的成熟多肽。
2.權(quán)利要求1的多肽，其包含與SEQ?ID?NO：2的成熟多肽具有至少70％，優(yōu)選至少75％，更優(yōu)選至少80％，甚至更優(yōu)選至少85％，甚至更優(yōu)選至少90％，并且最優(yōu)選至少95％同一性的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求1的多肽，所述多肽包含SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列或由SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列組成；或包含其具有β-葡糖苷酶活性的片段或由其具有β-葡糖苷酶活性的片段組成。
4.權(quán)利要求3的多肽，所述多肽包含SEQ?ID?NO：2的成熟多肽或由SEQID?NO：2的成熟多肽組成。
5.權(quán)利要求1的多肽，所述多肽由在優(yōu)選至少中嚴(yán)緊條件，更優(yōu)選至少中-高嚴(yán)緊條件，并且最優(yōu)選至少高嚴(yán)緊條件下與以下序列雜交的多核苷酸編碼：(i)SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列，(ii)SEQ?ID?NO：1的成熟多肽編碼序列中包含的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的互補(bǔ)鏈。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的多肽，其中所述成熟多肽是SEQ?ID?NO：2的氨基酸37至878。
7.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的多肽，其中所述成熟多肽編碼序列是SEQ?IDNO：1的核苷酸171至2753。
8.權(quán)利要求1的多肽，其中所述多肽是變體，所述變體包含保守取代、缺失和/或插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸的SEQ?ID?NO：2的氨基酸37至878。
9.權(quán)利要求1的多肽，所述多肽由質(zhì)粒pKKAB中包含的多核苷酸編碼，所述質(zhì)粒包含于大腸桿菌NRRL?B-30860中。
10.權(quán)利要求1的多肽，其包含A-E-[ST]-[IV]-[KR]-G-[IM]-Q-[DS]-[ST]-G-V-[IV]-A。
11.分離的多核苷酸，其包含編碼權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的多肽的核苷酸序列。
12.核酸構(gòu)建體，其包含權(quán)利要求11的多核苷酸，所述多核苷酸與一個(gè)或多個(gè)調(diào)控序列可操作地連接，所述調(diào)控序列指導(dǎo)多肽在表達(dá)宿主中產(chǎn)生。
13.重組表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求12的核酸構(gòu)建體。
14.重組宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求12的核酸構(gòu)建體。
15.用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的多肽的方法，其包括：(a)在有益于所述多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)細(xì)胞，所述細(xì)胞以其野生型形式能夠產(chǎn)生所述多肽；和(b)回收所述多肽。
16.用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的多肽的方法，其包括：(a)在有益于所述多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)包含核酸構(gòu)建體的宿主細(xì)胞，所述核酸構(gòu)建體包含編碼所述多肽的核苷酸序列；和(b)回收所述多肽。
17.用于產(chǎn)生親本細(xì)胞突變體的方法，所述方法包括破壞或缺失編碼權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的多肽的核苷酸序列，其導(dǎo)致突變體與親本細(xì)胞相比產(chǎn)生較少的所述多肽。
18.通過(guò)權(quán)利要求17的方法產(chǎn)生的突變細(xì)胞。
19.權(quán)利要求18的突變細(xì)胞，所述突變細(xì)胞還包含編碼天然或異源蛋白質(zhì)的基因。
20.用于產(chǎn)生蛋白質(zhì)的方法，其包括：(a)在有益于蛋白質(zhì)產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求19的突變細(xì)胞；和(b)回收所述蛋白質(zhì)。
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