[發(fā)明專利]用于小麥的新選擇系統(tǒng)

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680033736.2
• 申請(qǐng)日: 2006-09-11
• 公開（公告）號(hào): CN101351555A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·特里富諾娃;L·曼金;B·杰迪佐娃;B·林德曼;F·安德森
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 巴斯福植物科學(xué)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C12N9/88;C12N9/10;C12N9/06
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小麥植物的方法，包括步驟

a.向小麥細(xì)胞或組織導(dǎo)入包含至少一種第一表達(dá)構(gòu)建體的DNA構(gòu)建 體，其中所述第一表達(dá)構(gòu)建體包含在所述小麥植物中有活性的啟動(dòng)子和與 其有效連接的編碼能夠代謝D-丙氨酸和/或D-絲氨酸的酶的核酸序列，和

b.將步驟a)的所述小麥細(xì)胞或組織在包含總濃度3mM至100mM的 D-丙氨酸和/或D-絲氨酸和/或其衍生物的選擇培養(yǎng)基上孵育至少5天時(shí)間， 和

c.轉(zhuǎn)移步驟b)的所述小麥細(xì)胞或組織至再生培養(yǎng)基并且再生和選擇 包含所述DNA構(gòu)建體的小麥植物。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法包括如下步驟：

a.分離小麥植物的不成熟胚，和

b.將未受去分化處理的所述分離的不成熟胚與屬于根瘤菌屬 (Rhizobiaceae)的包含至少一種轉(zhuǎn)基因T-DNA的細(xì)菌共培養(yǎng)，所述 T-DNA包含至少一種第一表達(dá)構(gòu)建體，其中所述第一表達(dá)構(gòu)建體包含在所 述小麥植物中有活性的啟動(dòng)子和與其有效連接的編碼能夠代謝D-丙氨酸 和/或D-絲氨酸的酶的核酸序列，和

c.轉(zhuǎn)移已共培養(yǎng)的不成熟胚至恢復(fù)培養(yǎng)基，所述恢復(fù)培養(yǎng)基缺少毒害 植物有效量的D-絲氨酸或D-丙氨酸，和

d.在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)胚發(fā)生愈傷組織的形成并且選擇轉(zhuǎn)基因愈傷組織， 其中所述培養(yǎng)基包含，

i.有效量的至少一種植物生長素化合物，和

ii.總濃度3mM至100mM的D-丙氨酸和/或D-絲氨酸，以及

e.自所述轉(zhuǎn)基因愈傷組織再生并選擇含有轉(zhuǎn)基因T-DNA的植物。

3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中權(quán)利要求1的DNA構(gòu)建體或權(quán) 利要求3的T-DNA還包含賦予所述小麥植物農(nóng)學(xué)上有價(jià)值的性狀的至少 一種第二表達(dá)構(gòu)建體。

4.權(quán)利要求2或3所述的方法，其中植物生長素化合物的有效量等效 于濃度0.2mg/l至6mg/l的2，4-D。

5.權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)所述的方法，其中能夠代謝D-丙氨酸 或D-絲氨酸的酶選自D-絲氨酸脫氨酶(EC4.3.1.18)、D-氨基酸氧化酶 (EC1.4.3.3)和D-丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(EC2.6.1.21)。

6.權(quán)利要求1至5中任意一項(xiàng)所述的方法，其中能夠代謝D-絲氨酸 的酶選自

i)如表1中所示的D-絲氨酸脫氨酶，

ii)與如表1中所示的D-絲氨酸脫氨酶具有相同的酶活性并且與其氨 基酸序列具有至少80％(優(yōu)選地至少85％，更優(yōu)選地至少90％，甚至更優(yōu) 選地至少95％，最優(yōu)選地至少98％)同一性的酶；

iii)酶，其與如表1中所示的D-絲氨酸脫氨酶具有相同的酶活性并且 編碼其的核酸序列與編碼如表1中所示的D-絲氨酸脫氨酶的核酸序列具有 至少80％(優(yōu)選地至少85％，更優(yōu)選地至少90％，甚至更優(yōu)選地至少95％， 最優(yōu)選地至少98％)的同一性，和

iv)酶，其由能夠與編碼如表1所示D-絲氨酸脫氨酶的序列的互補(bǔ)物 雜交的核酸序列編碼，

并且其中選擇是在包含濃度3mM至100mM的D-絲氨酸的培養(yǎng)基上 進(jìn)行的；

或其中能夠代謝D-絲氨酸和D-丙氨酸的酶選自

i)如表1中所示的D-氨基酸氧化酶，和

ii)與如表1中所示的D-氨基酸氧化酶具有相同的酶活性并且與其氨 基酸序列具有至少80％(優(yōu)選地至少85％，更優(yōu)選地至少90％，甚至更優(yōu) 選地至少95％，最優(yōu)選地至少98％)同一性的酶；

iii)酶，其與如表1中所示的D-氨基酸氧化酶具有相同的酶活性并且 編碼其的核酸序列與編碼如表1中所示的D-氨基酸氧化酶的核酸序列具有 至少80％(優(yōu)選地至少85％，更優(yōu)選地至少90％，甚至更優(yōu)選地至少95％， 最優(yōu)選地至少98％)的同一性，和

iv)酶，其由能夠與編碼如表1所示D-氨基酸氧化酶的序列的互補(bǔ)物 雜交的核酸序列編碼，

并且其中選擇是在包含總濃度3mM至100mM的D-丙氨酸和/或D- 絲氨酸的培養(yǎng)基上進(jìn)行的。