[發明專利]用于真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子生產的液體培養基

無效

• 申請號: 200680032851.8
• 申請日: 2006-09-13
• 公開（公告）號: CN101263221A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發明（設計）人: 卡洛斯·曼紐爾·安圖內斯·佛朗哥
• 申請（專利權）人: 埃武拉大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 北京中北知識產權代理有限公司
• 代理人: 吳立

技術領域

本發明涉及在液體培養生產真菌厚垣孢普克尼亞(pochoniachlamydosporia)的厚垣孢子。也涉及這些液體培養基的營養素和組分。這些培養基可以是完全合成的，而且通過連續添加單個純營養素而組成，或它們可能是復雜混合物，其通過從生物產品中提取而得到，所述生物產品具有生產真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子的能力。本發明還涉及液體培養基的組分以生產大于10⁴個厚垣孢子/ml培養基。

背景技術

目前，正如IOBC/OILB研究手冊(Kerry?&?Bourne，2002)所詳細描述，真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子僅能夠使用固體培養基而生產。用于實驗室中，可以使用瓊脂培養基生產厚垣孢子，例如，最常用(Kerry&?Bourne，2002)的CMA(玉米粉瓊脂)。

厚垣孢子的大量生產常基于從谷類得到的固體培養基，尤其是大麥、玉米(Kerry?&?Bourne，2002)或大米(Atkins?et?al.，2003)。它可以使用全谷物、破碎谷物或經研磨的谷物，單獨地或與惰性原料相混合以提高培養基的物理特性。

使用液體培養基生產厚垣孢子不是不可行就是根據使用的培養基的產量非常小(小于10³個厚垣孢子/ml培養基)。還沒有公開的專利涉及用真菌厚垣孢普克尼亞且使用液體培養基而生產厚垣孢子。目前，沒有可知的能夠大量(大于10³個厚垣孢子/ml培養基)生產真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子液體培養基(Liu，X.Z.?&?Chen，S.Y.，2003；Mo，M.et?al.，2005)

發明內容

本發明要解決的主要問題是解決之前在液體培養基生產厚垣孢子的不可能性。本發明的特征在于提供了使真菌厚垣孢普克尼亞生長的液體培養基的組分，用以在浸入式液體培養中生產厚垣孢子，該培養基通過純底物的混合得到，或動物源或植物源的復合產物的混合而得到，其中組分內包括蛋白質、脂類和礦物鹽。

關于上述問題，在本發明前是有液體培養基系統大量生產真菌厚垣孢普克尼亞，從而大量生產厚垣孢子(大于10³個厚垣孢子/ml培養基)是不可能的。本發明的特征在于提供了適于大量生產厚垣孢子的液體培養基的組分，而且提供了適于生產大于10⁶個厚垣孢子/ml培養基的培養基的組分。

具體實施方式

已發展的液體培養基用作微囊生長的底物，而且跟隨真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子(磚格厚垣孢子或粉末孢子類型的分生孢子)的浸入式生產。培養基的成分用蒸餾水混合，其中的大部分是固體的，盡管它們有些具有液體或固體的天然形態。依據使用的底物類型，這些成分形成水溶液、乳濁液或懸浮液，而且最終混合物是一種復合乳濁液，其中兩性和極性的底物包裹了那些具有很小極性的成分。然而，通過這種方式形成的培養基產出穩定的混合物，在室溫和常壓下(10-25℃而且接近1個大氣壓)通常具有很小的渾濁度。所有的培養基在接種厚垣孢普克尼亞前都需要滅菌。這很重要，因為這些培養基營養豐富而且因此支持大量不同種類的，即那些污染培養基成分的生物體生長。

是培養基最終組分的一部分的底物的種類包括：球蛋白、磷脂、甘油三酸脂、可溶性糖和礦物鹽。

下面描述進入培養基組分的底物及其足量的濃度：

球蛋白：白蛋白和/或酪蛋白和/或球蛋白-0.05g/l-500g/l；

磷脂：磷脂酰膽堿和/或磷脂酰乙醇胺和/或其它磷脂的復合混合物，如卵磷脂-0.05g/l-100g/l；

甘油三酸脂：向日葵油或任一其它的植物油-0g/l-100g/l；

可溶性糖：蔗糖和/或其它二糖和/或葡萄糖和/或其它單糖和/或其它可溶性糖-0g/l-50g/l；

礦物鹽：

a)鈣：0-25mM；

b)氯：0-25mM；

c)鈉：0-50mM；

d)鎂：0-25mM；

e)硫酸鹽：0-25mM；

f)鉀：0-50mM；

g)磷酸鹽：0-25mM；

h)鐵：0-5mM；h)硝酸鹽：0-50mM。

生產大于10⁵個厚垣孢子/ml培養基的液體培養基的實例如下所述：

白蛋白或酪蛋白-1g/l

磷脂酰膽堿或卵磷脂-1g/l

向日葵油-1g/l

氯化鈉(NaCl)-0.4g/l