[發(fā)明專利]用于真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子生產(chǎn)的液體培養(yǎng)基

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680032851.8
• 申請(qǐng)日: 2006-09-13
• 公開（公告）號(hào): CN101263221A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 卡洛斯·曼紐爾·安圖內(nèi)斯·佛朗哥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 埃武拉大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14
• 代理公司: 北京中北知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 吳立

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及在液體培養(yǎng)生產(chǎn)真菌厚垣孢普克尼亞(pochoniachlamydosporia)的厚垣孢子。也涉及這些液體培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)素和組分。這些培養(yǎng)基可以是完全合成的，而且通過連續(xù)添加單個(gè)純營(yíng)養(yǎng)素而組成，或它們可能是復(fù)雜混合物，其通過從生物產(chǎn)品中提取而得到，所述生物產(chǎn)品具有生產(chǎn)真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子的能力。本發(fā)明還涉及液體培養(yǎng)基的組分以生產(chǎn)大于10⁴個(gè)厚垣孢子/ml培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

目前，正如IOBC/OILB研究手冊(cè)(Kerry?&?Bourne，2002)所詳細(xì)描述，真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子僅能夠使用固體培養(yǎng)基而生產(chǎn)。用于實(shí)驗(yàn)室中，可以使用瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)厚垣孢子，例如，最常用(Kerry&?Bourne，2002)的CMA(玉米粉瓊脂)。

厚垣孢子的大量生產(chǎn)常基于從谷類得到的固體培養(yǎng)基，尤其是大麥、玉米(Kerry?&?Bourne，2002)或大米(Atkins?et?al.，2003)。它可以使用全谷物、破碎谷物或經(jīng)研磨的谷物，單獨(dú)地或與惰性原料相混合以提高培養(yǎng)基的物理特性。

使用液體培養(yǎng)基生產(chǎn)厚垣孢子不是不可行就是根據(jù)使用的培養(yǎng)基的產(chǎn)量非常小(小于10³個(gè)厚垣孢子/ml培養(yǎng)基)。還沒有公開的專利涉及用真菌厚垣孢普克尼亞且使用液體培養(yǎng)基而生產(chǎn)厚垣孢子。目前，沒有可知的能夠大量(大于10³個(gè)厚垣孢子/ml培養(yǎng)基)生產(chǎn)真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子液體培養(yǎng)基(Liu，X.Z.?&?Chen，S.Y.，2003；Mo，M.et?al.，2005)

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的主要問題是解決之前在液體培養(yǎng)基生產(chǎn)厚垣孢子的不可能性。本發(fā)明的特征在于提供了使真菌厚垣孢普克尼亞生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基的組分，用以在浸入式液體培養(yǎng)中生產(chǎn)厚垣孢子，該培養(yǎng)基通過純底物的混合得到，或動(dòng)物源或植物源的復(fù)合產(chǎn)物的混合而得到，其中組分內(nèi)包括蛋白質(zhì)、脂類和礦物鹽。

關(guān)于上述問題，在本發(fā)明前是有液體培養(yǎng)基系統(tǒng)大量生產(chǎn)真菌厚垣孢普克尼亞，從而大量生產(chǎn)厚垣孢子(大于10³個(gè)厚垣孢子/ml培養(yǎng)基)是不可能的。本發(fā)明的特征在于提供了適于大量生產(chǎn)厚垣孢子的液體培養(yǎng)基的組分，而且提供了適于生產(chǎn)大于10⁶個(gè)厚垣孢子/ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的組分。

具體實(shí)施方式

已發(fā)展的液體培養(yǎng)基用作微囊生長(zhǎng)的底物，而且跟隨真菌厚垣孢普克尼亞的厚垣孢子(磚格厚垣孢子或粉末孢子類型的分生孢子)的浸入式生產(chǎn)。培養(yǎng)基的成分用蒸餾水混合，其中的大部分是固體的，盡管它們有些具有液體或固體的天然形態(tài)。依據(jù)使用的底物類型，這些成分形成水溶液、乳濁液或懸浮液，而且最終混合物是一種復(fù)合乳濁液，其中兩性和極性的底物包裹了那些具有很小極性的成分。然而，通過這種方式形成的培養(yǎng)基產(chǎn)出穩(wěn)定的混合物，在室溫和常壓下(10-25℃而且接近1個(gè)大氣壓)通常具有很小的渾濁度。所有的培養(yǎng)基在接種厚垣孢普克尼亞前都需要滅菌。這很重要，因?yàn)檫@些培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富而且因此支持大量不同種類的，即那些污染培養(yǎng)基成分的生物體生長(zhǎng)。

是培養(yǎng)基最終組分的一部分的底物的種類包括：球蛋白、磷脂、甘油三酸脂、可溶性糖和礦物鹽。

下面描述進(jìn)入培養(yǎng)基組分的底物及其足量的濃度：

球蛋白：白蛋白和/或酪蛋白和/或球蛋白-0.05g/l-500g/l；

磷脂：磷脂酰膽堿和/或磷脂酰乙醇胺和/或其它磷脂的復(fù)合混合物，如卵磷脂-0.05g/l-100g/l；

甘油三酸脂：向日葵油或任一其它的植物油-0g/l-100g/l；

可溶性糖：蔗糖和/或其它二糖和/或葡萄糖和/或其它單糖和/或其它可溶性糖-0g/l-50g/l；

礦物鹽：

a)鈣：0-25mM；

b)氯：0-25mM；

c)鈉：0-50mM；

d)鎂：0-25mM；

e)硫酸鹽：0-25mM；

f)鉀：0-50mM；

g)磷酸鹽：0-25mM；

h)鐵：0-5mM；h)硝酸鹽：0-50mM。

生產(chǎn)大于10⁵個(gè)厚垣孢子/ml培養(yǎng)基的液體培養(yǎng)基的實(shí)例如下所述：

白蛋白或酪蛋白-1g/l

磷脂酰膽堿或卵磷脂-1g/l

向日葵油-1g/l

氯化鈉(NaCl)-0.4g/l