[發明專利]核酸向組織細胞中的電轉移

無效

• 申請號: 200680031640.2
• 申請日: 2006-09-01
• 公開（公告）號: CN101252953A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: L·米爾;D·米克拉夫契奇
• 申請（專利權）人: 生物聯盟制藥公司;國立科學研究中心;古斯塔夫·魯西研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61N1/32
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

本發明涉及核酸經電介導的基因轉移進入組織細胞、特別是肌肉 或腫瘤細胞中。

電介導的基因轉移也稱DNA電轉移或者電基因療法，已經得到 密切關注，因為這是體內非病毒基因轉移的最有效方法之一(Andre and?Mir，2004)。所述方法已經顯示有效地將質粒DNA電轉移進多種 組織中：肌肉(Aihara?and?Miyazaki，1998；Mir?et?al.，1998a；Mir?et?al.， 1999)，肝(Heller?et?al.，1996；Suzuki?et?al.，1998)，皮膚(Titomirov?et?al.， 1991；Zhang?et?al.，1996)，腫瘤(Heller?et?al.，2000；Wells?et?al.，2000； Heller?and?Coppola，2002)，小鼠睪丸(Muramatsu?et?al.，1997； Muramatsu?et?al.，1998)等組織中(Andre?and?Mir，2004)。

電脈沖介導DNA轉移進靶細胞的機制還未十分明了。然而，普 遍認為為了改善DNA轉移進組織中，該組織中細胞必須是可通透的。 這種通透可以使用簡便的短方波電脈沖(在100μs范圍內)而實現(Mir et?al.，1991?b；Gehl?et?al.，1999；Miklavcic?et?al.，2000)。這種脈沖已經 在稱作“抗腫瘤電化學療法”的治療中廣泛用于局部輸送非通透性抗 癌藥物(如博來霉素或順鉑(cisplatin))(Mir?et?al.，199la；Glass?et?al.， 1997；Sersa?et?al.，1998；Mir?et?al.，1998b；Rodriguez?et?al.，2002)。事 實上，在體外或體內為腫瘤輸送例如8次1300?V/cm和100μs脈沖足 以誘導細胞膜瞬時重排，使得非通透性抗癌分子如博來霉素通過擴散 進入細胞并且充分發揮其胞毒性活性(Poddevin?et?al.，1991；Mir?et?al.， 1991b；Gehl?et?al.，1998)。

這些短通透性電脈沖也已經顯示增加質粒DNA向一些組織的轉 移(Heller?et?al.，1996；Heller?et?al.，2000)。然而，另一種類型的方波電 脈沖被用于肌肉(Aihara?and?Miyazaki，1998；Mir?et?al.，1999)、腫瘤 (Rols?et?al.，1998)、肝(Suzuki?et?al.，1998)及一些其它組織(Andre?and Mir，2004)，并發現其對于DNA電轉移更有效(Mir?et?al.，1999；Heller et?al.，2000)。這些脈沖通常是較低電壓但較長持續時間(在幾十毫秒范 圍內)(Aihara?and?Miyazaki，1998；Rols?et?al.，1998；Mir?et?al.，1999； Bettan?et?al.，2000；Matsumoto?et?al.，2001)。推測這種類型的脈沖通過 誘導兩種獨特的效應而介導DNA轉移進細胞中，所述獨特效應包括 細胞透化(如短脈沖)和在輸送電場期間DNA電泳遷移(Klenchin?et?al.， 1991；Sukharev?et?al.，1992；Neumann?et?al.，1996；Mir?et?al.，1999； Golzio?et?al.，2002)。

有效的電轉移進肌細胞中已經在WO-A-99/01158中使用一或多 次(直至100,000次)1-800伏特/cm的單極電脈沖加以描述，并且在 WO-A-98/43702中使用5-200伏特/cm電流刺激加以描述，其中所述 電流可以是2-30,000方波雙極脈沖形式。

電脈沖對于體內DNA電轉移的雙重作用通過如下方式而證實， 即使用由高壓短脈沖(或稱HV；例如800V/cm和100μs)和隨后的低 壓長脈沖(或稱LV；例如80V/cm和100ms)組成的電脈沖組合而證 實(Bureau?et?al.，2000；Satkauskas?et?al.，2002)。這項研究顯示這些HV 和LV脈沖可以在HV與LV之間由不同的延遲(lag)隔開，而不明 顯喪失轉染效力。這些延遲的范圍在對于1次HV和1次LV處理而 言為直至300s，對于1次HV和4次LV組合而言為直至3000s (Satkauskas?et?al.，2002)。