[發明專利]用于生產全2’-修飾的核酸轉錄產物的材料和方法

無效

• 申請號: 200680031348.0
• 申請日: 2006-06-30
• 公開（公告）號: CN101495504A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 莎倫·T·克洛德;約翰·L·戴納;安東尼·多米尼克·克費;克里斯汀·湯普森;王春華
• 申請（專利權）人: 阿切埃米克斯有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07H21/04;C12P21/06;A61K38/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 過曉東

1.一種分離的T7?RNA聚合酶，在639位點和784位點包括一 種改變的氨基酸，其中，當在784位點的改變的氨基酸是丙 氨酸時，在639位點的改變的氨基酸不是苯基丙氨酸。

2.根據權利要求1所述的分離的T7?RNA聚合酶，在378位點 進一步包括一種改變的氨基酸。

3.根據上述任意一項權利要求所述的分離的T7?RNA聚合酶， 在266位點進一步包括一種改變的氨基酸。

4.根據上述任意一項權利要求所述的分離的T7?RNA聚合酶， 其中，在639位點的改變的氨基酸是亮氨酸，在784位點的 改變的氨基酸是丙氨酸。

5.根據上述任意一項權利要求所述的分離的T7?RNA聚合酶， 其中，在266位點的改變的氨基酸是亮氨酸。

6.根據上述任意一項權利要求所述的分離的T7?RNA聚合酶， 其中，在378位點的改變的氨基酸是精氨酸。

7.根據上述任意一項權利要求所述的分離的T7?RNA聚合酶， 其中，改變的氨基酸增加了由聚合酶在包括2’-OMe修飾核 苷三磷酸的轉錄反應中產生的包括2’-OMe修飾作用的核酸 的轉錄產量。

8.根據權利要求8所述的分離的T7?RNA聚合酶，其中，當轉 錄作用在同一個轉錄條件下進行時，轉錄產量的增加與缺乏 改變的氨基酸的T7?RNA聚合酶有關。

9.根據上述任意一項權利要求所述的分離的T7?RNA聚合酶， 其中，改變的氨基酸減弱對2’-OMe核苷三磷酸的識別能力。

10.根據權利要求9所述的分離的T7?RNA聚合酶，其中減弱的 對2’-OMe核苷三磷酸的識別能力與缺乏改變的氨基酸的T7 RNA聚合酶有關。

11.根據權利要求8或10所述的分離的T7?RNA聚合酶，其中， 缺乏改變的氨基酸的T7?RNA聚合酶是一種野生型T7?RNA 聚合酶，該野生型聚合酶在639位點上的氨基酸變為苯基丙 氨酸且在784位點上的氨基酸改變為丙氨酸。

12.一種分離的多肽，包括選自由SEQ?ID?NO?1，SEQ?ID?NO 2，SEQ?ID?NO?102和SEQ?ID?NO?103所組成的組的氨基 酸。

13.一種轉錄單鏈核酸的方法，包括將前述任意一項權利要求所 述的聚合酶與一種模板核酸在足夠產生轉錄作用的反應條 件下一起培養。

14.一種分離的核酸，該核酸編碼前述任意一項權利要求所述的 多肽。

15.一種分離的核酸序列，選自由SEQ?ID?NO?122，SEQ?ID?N O?123，SEQ?ID?NO?124和SEQ?ED?NO?125所組成的組 中。

16.一種載體，包括權利要求14或15所述的分離的核酸序列。

17.一種表達載體，包括與一種啟動子可操作地連接的權利要求 14或15所述的分離的核酸。

18.一種細胞，包括權利要求17所述的表達載體。

19.根據權利要求18所述的細胞，其中突變體T7?RNA聚合酶 被該細胞表達。

20.一種試劑盒，包括一種容器，該容器包括根據上述任意一項 權利要求所述的T7?RNA聚合酶。

21.一種試劑盒，包括一種容器，該容器包括一種核酸，該核酸 編碼上述任意一項權利要求所述的T7?RNA聚合酶。