[發明專利]用于二維（2D）凝膠電泳的系統

無效

• 申請號: 200680031130.5
• 申請日: 2006-08-18
• 公開（公告）號: CN101268361A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 托馬斯·珀爾
• 申請（專利權）人: 維塔有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司
• 代理人: 張敬強

技術領域

本發明涉及一種用于二維凝膠電泳的系統，其中在電泳的至少一維上，其功能核心部件基本由可麗耐(Corian)材料形成。而且，至少一個電極優選被設計成在第一維上是可移動形式的，以至于它能夠適應不同的凝膠長度。

背景技術

作為一種有效而溫和的方法，現有技術的電泳被用于例如蛋白質和氨基酸的分離，也用于整個細胞的分離。它利用了荷電粒子在電場中的不同偏差來實現分離效果。偏差度主要受兩個電極間的場強度和被分離粒子的電遷移率的影響。遷移率的水平依賴于各種數量，例如被分離粒子的電荷和大小、以及pH值、緩沖液的粘性和離子強度。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)這一傳統一維方法能夠從單一樣品中最多分離約100種蛋白質，由于這種原因，它們不適合分析例如涉及細胞提取物的復雜蛋白質混合物。

現今，二維電泳是分離復雜蛋白質混合物最有效的技術。它根據二個不同參數來分離蛋白質，即等電點(第一維中的等電點pl)和電泳遷移率(第二維中)。2D電泳具有多種用途。因此，例如，分析不同的有機體和細胞類型中的蛋白質特性。分析蛋白質分段的純度，并測定等電點，亞單元(subunits)的分子量和異構數量。為復雜蛋白混合物的分離提供最佳分辨率的二維凝膠電泳系統中，它將在第一維中存在尿素和中性洗滌劑情況下的等電聚焦(IEF)與在第二維中用十二烷基硫酸鈉(SDS)改性的條件下的平板凝膠電泳相結合(O’Farrell，P.H.(1975)，J.Biol.Chem.250，4007-4021)。分離系統使用兩個獨立的蛋白質特性：一個是由等電點(pl)反映的電荷，另外一個是決定十二烷基硫酸鈉-蛋白質復合物(SDS-protein?complexes)在聚丙烯酰胺凝膠中遷移率的分子量。O’Farrell已經首次論證了該技術的巨大潛力，它能夠在細胞的提取物中分辨超過1,000種蛋白質。但是，在使用兩性電解質載體的等電聚焦/十二烷基硫酸鈉(IEF/SDS)系統中，堿性蛋白質就會通常因為它遷移到等電聚焦凝膠的能力差而分離的不夠充分。即使使用更多種堿性兩性電解質，在堿性范圍的pH梯度的跨度也變小了，因為由于陰極偏移，在pH7.5以上時梯度的上升不明顯。此外，在這樣的條件下少量堿性蛋白質進入等電聚焦凝膠中總是導致條紋的產生。但是，就如O’Farrcll所描述的，這個問題能夠通過在第一維中使用非均衡pH梯度電泳(NEPHGE)來避免。

非均衡pH梯度電泳和等電聚焦的主要區別是：前者的樣品被應用到凝膠的酸性一側并且其電壓×時間的乘積比等電聚焦中的該值小。在這種情況下，pH梯度不會達到充分均衡。結果，蛋白質不會像等電聚焦中那樣完全集中在它們的等電點。然而，絕大多數蛋白質還是根據在非均衡pH梯度電泳凝膠中不同的電荷而被分離。

用在二維電泳中的所熟知的系統有許多缺點：考慮到安全性，第一維沒有受到充分的保護來防止所使用高電壓的影響；此外，許多系統被要求能夠適應不同的凝膠長度，而且，用于第二維的設備不易搬運；例如，它們不是可疊起堆放的，因此具有高度的空間要求，并消耗一些化學藥品。

發明內容

本發明通過根據權利要求所述的系統方式來解決這個問題。

在用于二維凝膠電泳的本發明的系統中，至少一個功能核心部件基本上由可麗耐材料形成。例如，功能核心部件可以是在第二維中凝膠位于其上的平板。可麗耐材料中可以具有能提供冷卻系統的鉆孔洞。這樣，該系統能夠采用一種更緊湊的設計。更具體地，用于第二維的設備能夠水平堆疊和消耗較少的化學藥品。

該系統包括分別用于第一維和第二維電泳的至少兩個部件、以及第一維和第二維凝膠電泳，其中，第一維包括一能夠適合不同凝膠長度的電極，并且第一維被樹脂玻璃制成的外殼體包圍，該外殼體包括至少一扇具有一個用于電路的常開觸點(NO觸點)的門，并且其中第二維凝膠電泳基本由可麗耐材料制成。這種系統優點在于：當打開一扇門或多扇門時，電路被中斷，并且當鎖上多扇門時電路被關閉。例如，通過門上的一個觸點以及設備底部的相應觸點產生的電路中斷、能夠被設計成用于第一維。

在一個優選方式中，材料是可麗耐雪白系列(Corian?Glacier?White)。

在本發明的一個優選實施方式中，第一維中的至少一個電極位于接觸臂上的可移動支架上。

本發明也涉及可麗耐在用于制造凝膠電泳系統、特別是用于制造功能部件中的用途。這種材料的優點是具有延展性、易成型性、以及因而可成型性為例如具有空腔和溝槽的部件，從而能夠被用于冷卻的目的，這些只是舉例說明而并非窮舉。大量的系統通常使用人們所熟知的無韌性玻璃。