[發(fā)明專利]核酸的提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680030374.1
• 申請(qǐng)日: 2006-09-28
• 公開（公告）號(hào): CN101243186A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金原秀行;佐佐木翼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 富士膠片株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 丁業(yè)平;張?zhí)焓?/td>

1.一種核酸提取方法，該方法包括：

(a)通過(guò)以下步驟(i)或(ii)制備含有溶液的生物材料：

步驟(i)，制備含有磷酸鹽緩沖液或Bis-Tris(N，N-雙(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷)緩沖液的生物材料；或

步驟(ii)，用Bis-Tris緩沖液替換所述生物材料中所含有的緩沖液；

(b)通過(guò)使所述的生物材料與裂解液接觸來(lái)使所述生物材料溶解，并溶出所述生物材料中所含有的核酸；

(c)通過(guò)向由所述步驟(b)制得的含有溶出的核酸的溶液中加入水溶性有機(jī)溶劑來(lái)制備裂解物溶液；

(d)通過(guò)使所述的裂解物溶液與固體材料接觸來(lái)使所述裂解物溶液中所含有的所述核酸被所述的固體材料吸附；

(e)洗掉殘留在所述固體材料中的除了待提取的所述核酸之外的雜質(zhì)、和裂解液；以及

(f)通過(guò)回收液使所述的被吸附的核酸從所述固體材料上解吸附。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取方法，

其中所述步驟(a)中的所述溶液為分散介質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核酸提取方法，

其中所述步驟(a)中的所述溶液的濃度為0.01摩爾/升至10摩爾/升，并且其pH為3至9。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中所述步驟(b)中的所述裂解液含有離液鹽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸提取方法，

其中所述離液鹽的濃度為0.1摩爾/升至10摩爾/升。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中所述步驟(b)中的所述裂解液含有濃度為小于等于50體積％的水溶性有機(jī)溶劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的核酸提取方法，

其中所述裂解液中所含有的所述水溶性有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇或丁醇。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中所述步驟(b)中的所述裂解液含有表面活性劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸提取方法，

其中所述裂解液中所含有的所述表面活性劑的濃度為0.001質(zhì)量％至30質(zhì)量％。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中在所述步驟(b)中在加入所述的裂解液之后進(jìn)行至少一次的移液操作。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中在所述步驟(b)中在加入所述的裂解液之后或在所述的移液操作之后再進(jìn)行攪拌操作。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中所述步驟(c)中的所述裂解物溶液是通過(guò)以下過(guò)程制備的，所述過(guò)程為向所述的含核酸的裂解液中加入所述的水溶性有機(jī)溶劑，使得所述的裂解物溶液含有濃度為10體積％至60體積％的所述水溶性有機(jī)溶劑。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸提取方法，

其中在所述步驟(c)中使用的所述的水溶性有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇或丁醇。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中在所述的步驟(c)中在加入所述的水溶性有機(jī)溶劑之后進(jìn)行至少一次移液操作或攪拌操作。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的核酸提取方法，

其中攪拌時(shí)間為0.1秒至600秒。

16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的核酸提取方法，

其中在所述的步驟(c)中在加入所述的水溶性有機(jī)溶劑以及進(jìn)行攪拌操作或移液操作之后，進(jìn)一步進(jìn)行移液操作或攪拌操作。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的核酸提取方法，

其中攪拌時(shí)間為0.1秒至600秒。

18.根據(jù)權(quán)利要求1至17中任意一項(xiàng)所述的核酸提取方法，

其中在所述的步驟(f)中所述回收液的浸泡時(shí)間為0.1秒至1,600秒。