[發(fā)明專利]克隆的犬科動(dòng)物及其生產(chǎn)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680027246.1
• 申請(qǐng)日: 2006-07-26
• 公開（公告）號(hào): CN101228265A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃禹錫;李柄千;姜成根;金敏奎;張龜;吳炫周;金惠珍;金正柱;S·H·穆罕默德;H·F·尤達(dá)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 首爾大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力財(cái)團(tuán)
• 主分類號(hào): C12N5/16
• 分類號(hào): C12N5/16
• 代理公司: 北京潤(rùn)平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 周建秋;王鳳桐

1.一種制備犬科動(dòng)物的核移植胚胎的方法，該方法包括以下步驟：

(a)將犬科動(dòng)物的成熟的卵母細(xì)胞的細(xì)胞核去除掉，以制備去核的受體卵母細(xì)胞；

(b)從供體犬科動(dòng)物的組織中分離體細(xì)胞，以制備核供體細(xì)胞；

(c)將步驟(b)制備的所述核供體細(xì)胞顯微注射到步驟(a)制備的所述去核的卵母細(xì)胞中，并在3.0-3.5KV/cm的電壓下對(duì)供體細(xì)胞和去核的卵母細(xì)胞進(jìn)行電融合；和

(d)激活步驟(c)制備的融合的卵母細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述成熟的卵母細(xì)胞為在體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，所述在體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞是在排卵后48-72小時(shí)從犬科動(dòng)物收集得到的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(b)中的所述體細(xì)胞為選自由卵丘細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、表皮細(xì)胞、角化細(xì)胞、造血細(xì)胞、黑素細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胚胎生殖細(xì)胞、胎兒細(xì)胞、胎盤細(xì)胞和胚胎細(xì)胞所組成的組中的一種細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述體細(xì)胞為成纖維細(xì)胞或卵丘細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(c)中的所述電融合在3.0-3.5KV/cm的直流電壓下進(jìn)行1-3次，每次10-30μs。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(d)中的激活步驟是通過用鈣離子載體和6-二甲基氨基嘌呤對(duì)融合的卵母細(xì)胞進(jìn)行同時(shí)或逐步的處理而進(jìn)行的。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述激活方法是通過用5-10μM的鈣離子載體將融合的卵母細(xì)胞在37-39℃下處理3-5分鐘，然后用1.5-2.5mM的6-二甲基氨基嘌呤將融合的卵母細(xì)胞在37-39℃下處理4-5小時(shí)而進(jìn)行的。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述犬科動(dòng)物選自由狗、狼、狐、豺、叢林狼、韓國(guó)狼和貍所組成的組中。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述犬科動(dòng)物選自由狗、狼和狐所組成的組中。

11.一種核移植胚胎，該核移植胚胎是由權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)所述的方法制備的。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的核移植胚胎，該核移植胚胎保藏于韓國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為KCTC?10831?BP。

13.一種生產(chǎn)犬科動(dòng)物的方法，該方法包括將權(quán)利要求11或12所述的核移植胚胎移植到代孕母體的輸卵管中以生產(chǎn)活體后代的步驟。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述犬科動(dòng)物選自由狗、狼、狐、豺、叢林狼、韓國(guó)狼和貍所組成的組中。

15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述犬科動(dòng)物選自由狗、狐和狼所組成的組中。

16.一種克隆的犬科動(dòng)物，該克隆的犬科動(dòng)物是由權(quán)利要求13所述的方法生產(chǎn)的。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的克隆的犬科動(dòng)物，其中，所述克隆的犬科動(dòng)物的基因型與權(quán)利要求1所述的核供體細(xì)胞或核供體動(dòng)物相同。

18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的克隆的犬科動(dòng)物，其中，所述犬科動(dòng)物選自由狗、狼、狐、豺、叢林狼、韓國(guó)狼和貍所組成的組中。