[發(fā)明專利]可放大的發(fā)酵方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680023620.0 | 申請日： | 2006-05-24 |
| 公開（公告）號： | CN101213294A | 公開（公告）日： | 2008-07-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | M·埃默林格;F·亨內(nèi)克;H·普夫倫德;M·里爾;P·斯坦納 | 申請（專利權(quán)）人： | 賽托斯生物技術(shù)公司 |
| 主分類號： | C12N7/02 | 分類號： | C12N7/02;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京市金杜律師事務(wù)所 | 代理人： | 孟凡宏 |
| 地址： | 瑞士*** | 國省代碼： | 瑞士;CH |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 放大 發(fā)酵 方法 | ||
1.一種表達(dá)能夠通過自裝配形成VLP的噬菌體重組衣殼蛋白或其突變體或片段的方法，所述方法包括以下步驟：
a)將一種表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌宿主中，其中所述表達(dá)質(zhì)粒包含一種表達(dá)構(gòu)建體，其中所述表達(dá)構(gòu)建體包含(i)編碼所述重組衣殼蛋白或其突變體或片段的第一核苷酸序列，和(ii)可被乳糖誘導(dǎo)的啟動子；
b)在包含主碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述細(xì)菌宿主；其中所述培養(yǎng)以分批培養(yǎng)方式在所述啟動子被lacI阻遏的條件下進(jìn)行，其中所述細(xì)菌宿主過量表達(dá)所述lacI；
c)用所述主碳源向所述分批培養(yǎng)物中補(bǔ)料；和
d)利用一種誘導(dǎo)物誘導(dǎo)所述啟動子，其中繼續(xù)用所述主碳源向所述分批培養(yǎng)物中補(bǔ)料。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述噬菌體是RNA噬菌體。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述噬菌體選自：
a.)噬菌體Qβ；
b.)噬菌體AP205；
c.)噬菌體fr；
d.)噬菌體GA；
e.)噬菌體SP；
f.)噬菌體MS2；
g.)噬菌體M11；
h.)噬菌體MX1；
i.)噬菌體NL95；
j.)噬菌體f2；
k.)噬菌體PP7；和
l.)噬菌體R17。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述RNA噬菌體是Qβ。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述重組衣殼蛋白具有氨基酸序列SEQ?ID?NO：5。
6.權(quán)利要求1到5任一項的方法，其中所述表達(dá)構(gòu)建體包含第一終止密碼子和第二終止密碼子，其中所述第一終止密碼子直接定位于所述第一核苷酸序列的3’，并且其中第二終止密碼子直接定位于所述第一終止密碼子的3’，并且其中所述第一或第二終止密碼子的至少一個是TAA。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述表達(dá)構(gòu)建體包含第一核苷酸序列和第二核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列編碼QβCP，或其突變體或片段，并且其中所述第二核苷酸序列編碼QβA1蛋白或其突變體或片段，并且其中所述第一和第二核苷酸序列通過正好一個包含至少一個TAA終止密碼子的一段序列而隔開。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述表達(dá)構(gòu)建體包含核苷酸序列SEQID?NO：6或由核苷酸序列SEQ?ID?NO：6組成。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述表達(dá)質(zhì)粒包含核苷酸序列SEQ?IDNO：1或優(yōu)選地由核苷酸序列SEQ?ID?NO：1組成。
10.權(quán)利要求4的方法，其中所述第一核苷酸序列編碼噬菌體的突變外殼蛋白。
11.權(quán)利要求1到7任一項的方法，其中所述啟動子選自
a.)tac啟動子；
b.)trc啟動子；
c.)tic啟動子；
d.)lac啟動子；
e.)lacUV5啟動子；
f.)Psyn啟動子；
g.)lppa啟動子；
h.)lpp-lac啟動子；
i.)T7-lac啟動子；
j.)T3-lac啟動子；
k.)T5-lac啟動子；和
l.)與SEQ?ID?NO：2具有至少50％序列同源性的啟動子。
12.權(quán)利要求1到10任一項的方法，其中所述啟動子包含核苷酸序列SEQ?ID?NO：2。
13.權(quán)利要求1到12任一項的方法，其中所述主碳源是甘油。
14.權(quán)利要求1到13任一項的方法，其中所述分批培養(yǎng)物的所述補(bǔ)料以一定的流速進(jìn)行，其中所述流速以指數(shù)系數(shù)μ增長，并且其中優(yōu)選地所述指數(shù)系數(shù)μ低于μmax。
15.權(quán)利要求1到14任一項的方法，其中所述啟動子的所述誘導(dǎo)通過用所述誘導(dǎo)物和所述主碳源以恒定的流速向所述分批培養(yǎng)物中共補(bǔ)料而進(jìn)行。
16.權(quán)利要求1到14的任一方法，其中所述啟動子的所述誘導(dǎo)通過用所述誘導(dǎo)物和所述主碳源以漸增的流速向所述分批培養(yǎng)物中共補(bǔ)料而進(jìn)行。
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