[發明專利]細菌宿主細胞中甘露糖醇誘導的啟動子系統

有效

• 申請號: 200680020110.8
• 申請日: 2006-06-06
• 公開（公告）號: CN101193906A
• 公開（公告）日: 2008-06-04
• 發明（設計）人: J·C·施耐德;B·羅斯內
• 申請（專利權）人: 陶氏環球技術公司
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04;C12N15/00;C12P21/06;C12N1/20
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 戈泊

1.一種表達系統，所述表達系統包括至少一個包含甘露糖醇啟動子的核酸，其中該核酸序列包括至少299個連續核苷酸的區域，該區域位于熒光假單胞菌MB101?mtlE基因的上游。

2.一種分離的核酸構建物，所述分離的核酸構建物包括熒光假單胞菌基因啟動子的核酸序列，其中所述核酸序列選自：

(a)SEQ?ID?NO：9；

(b)SEQ?ID?NO?12；

(c)與SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO?12中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；和

(d)在高度嚴謹條件下，與a)、b)或c)中任意一個序列雜交的核苷酸序列。

3.如權利要求2所述的核酸構建物，其中所述啟動子可操作地連接到編碼相關肽的核酸序列上。

4.一種表達系統，所述表達系統包括權利要求3的構建物。

5.如權利要求4所述的表達系統，其中所述核酸構建物在熒光假單胞菌細胞中表達。

6.一種熒光假單胞菌細胞，所述細胞包括：

可操作地連接到碳源可誘導型啟動子上的編碼重組多肽的至少一個核酸構建物，所述啟動子選自甘露糖醇、葡萄糖醇和阿拉伯糖醇誘導型啟動子，

其中細菌細胞已經被基因工程改變，抑制了對能誘導碳源可誘導型啟動子的碳源的代謝或者降解。

7.如權利要求6所述的細胞，其中所述啟動子是甘露糖醇可誘導型啟動子。

8.如權利要求7所述的細胞，其中所述啟動子包括內源細菌甘露糖醇操縱子的推定啟動子。

9.如權利要求8所述的細胞，其中所述啟動子包括熒光假單胞菌mtlEFGKDYZ操縱子的推定啟動子。

10.如權利要求9所述的細胞，其中所述啟動子包括選自Seq.ID.No.9或Seq.ID.No.1?2的核酸序列。

11.如權利要求6所述的細胞，其中所述核酸構建物進一步包括作為mtl激活蛋白結合域的核酸序列。

12.如權利要求6所述的細胞，其中所述遺傳改變是甘露糖醇、阿拉伯糖醇、葡萄糖醇或其衍生物或類似物的代謝中所需要的基因的突變或者缺失。

13.如權利要求12所述的細胞，其中所述基因選自mtl操縱子。

14.如權利要求13所述的細胞，其中所述基因選自mtlD、mtlY、mtlZ或其組合。

15.一種方法，用于在熒光假單胞菌細胞中表達重組多肽，所述方法包括：

a)??提供能表達重組多肽的宿主細胞；

b)??用至少一個核酸構建物轉染宿主細胞，該核酸構建物編碼可操作地連接到碳源可誘導型啟動子上的重組多肽，該啟動子選自甘露糖醇、葡萄糖醇或阿拉伯糖醇可誘導型的啟動子；

c)在生長培養基中培養該宿主細胞；

d)將碳源加入到生長培養基中，以能夠從碳源可誘導型的啟動子誘導相關肽的表達的量添加，和

e)通過誘導碳源可誘導型啟動子，表達相關的重組多肽；和

f)分離表達的重組多肽；

其中細菌細胞已經被基因工程改變，從而抑制了能誘導碳源可誘導型啟動子的碳源的代謝或者降解。

16.如權利要求15所述的方法，其中所述啟動子是甘露糖醇可誘導型啟動子。

17.如權利要求16所述的方法，其中所述啟動子包括內源細菌甘露糖醇操縱子的推定啟動子。

18.如權利要求17所述的方法，其中所述啟動子包括熒光假單胞菌mtlEFGKDYZ操縱子的推定啟動子。

19.如權利要求18所述的方法，其中所述啟動子包括選自Seq.ID.No.9或Seq.ID.No.12的核酸序列。

20.如權利要求15所述的方法，其中所述啟動子進一步包括作為mtl激活蛋白結合區域的核酸序列。

21.如權利要求15所述的方法，其中所述遺傳改變是甘露糖醇、阿拉伯糖醇、葡萄糖醇或其衍生物或類似物的代謝中所需要的基因的突變或者缺失。