[發明專利]利用磁性納米顆粒分離靶成分的方法

無效

• 申請號: 200680019430.1
• 申請日: 2006-06-29
• 公開（公告）號: CN101189523A
• 公開（公告）日: 2008-05-28
• 發明（設計）人: 小島政芳;平井博幸;景山茂樹;阿部義彥
• 申請（專利權）人: 富士膠片株式會社
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N33/48
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 柳春琦

技術領域

本發明涉及一種在生命科學、醫學診斷等領域中從生物樣品諸如血清或血漿中分離靶成分的方法。例如，本發明涉及一種從生物樣品諸如血清或血漿中分離特定的脂蛋白級分的方法。本發明的方法能夠用于測定HDL級分中膽固醇等的含量，這樣的測定可用于進行臨床檢查。

技術背景

在血液中，脂質與脫輔基蛋白結合形成脂蛋白，然后脂蛋白被代謝。根據比重可將脂蛋白分為若干級分，諸如乳糜粒(CMs)，極低密度脂蛋白(VLDLs)，中等密度脂蛋白(IDLs)，低密度脂蛋白(LDLs)和高密度的脂蛋白(HDLs)。已知多種疾病影響這些脂蛋白的代謝，從而增加或降低血液中的脂蛋白級分。具體地，已知HDLs從多種組織，包括動脈壁獲得膽固醇，并且參與積累在細胞中的膽固醇的去除作用，HDLs是多種動脈硬化，如冠狀動脈硬化的危險防范因子，它在血液中的水平是預見動脈硬化發生的有用的指示劑。因此，在臨床檢查中進行對HDL級分中膽固醇的含量的測量，從而預防或診斷缺血性心臟病等。

作為分離脂蛋白的方法，已知超速離心法、電泳法、凝膠過濾法等。因為這些方法要求非常復雜的程序，所以這些方法在臨床檢查中不經常使用。因而，在臨床檢查中經常使用的是一種沉淀法(分級法)。廣泛而普遍地用作測定HDL膽固醇(下文中稱為HDL-C)的方法是分級法，該方法涉及通過向樣品添加分級劑來凝集除HDL外的脂蛋白，通過離心去除該脂蛋白，再測量僅含有分離的HDL的上清液中的膽固醇。為了測定HDL級分中膽固醇的含量，能夠利用用于測定膽固醇含量的已知試劑來測量所收集上清液的HDL級分中含有的膽固醇含量。

作為在上述沉淀法中所使用的沉淀劑，經常使用聚陰離子或聚陰離子和二價陽離子的組合。該聚陰離子的已知實例包括硫酸化的多聚糖如葡聚糖硫酸鹽和肝素，磷鎢酸及其鹽，和聚乙二醇。二價陽離子的已知實例包括Mg²⁺，Mn²⁺，Ca²⁺和Ni²⁺。

然而，由于上述沉淀法涉及通過添加分級劑進行分離的操作，所以該方法在下列方面存在問題：需要相對大量的樣品，需要儀器，如離心機，且可能出現人為操作的誤差。此外，所述沉淀(分級)法在應用于自動分析器時存在問題，而所述自動分析器在臨床檢查中經常使用。特別地，所述沉淀法要求通過離心來分級樣品的步驟，這樣該方法需要特定的處理時間以獲得分析對象的級分。因此，很難使用該方法對大量樣品進行快速分析。

近期，一種不要求這些復雜的操作并能用在自動分析器中的直接方法已迅速傳播開。例如，已知一種涉及使除HDL外的脂蛋白與用作凝集劑的環糊精硫酸鹽完全反應，然后再容許利用聚乙二醇修飾的酶與之作用，從而特定地測量HDL中的膽固醇。然而，需要修飾環糊精以抑制除HDL外共存脂蛋白的反應以及利用高成本產品如酶和抗體。

此外，已經報道了一種測定法，借此法并使用干的載玻片進行了沉淀法。然而，問題在于這樣的載玻片的構造很復雜(日本專利公開(KoKai)號2005-49346A)。此外，該沉淀法也主要用在干式化學領域中，但是近期發明了利用直接方法的干式試樣的新型技術。然而，這樣的技術在生產過程中涉及非常復雜的步驟，且存在高成本的問題。

日本專利公開(Kokai)號6-242110A(1994)公開了生物樣品中特定脂蛋白級分中含有的一種成分的含量是通過下述步驟直接測定的：凝集除了感興趣的特定級分外的脂蛋白級分；使該成分與一種試劑反應，利用該試劑能夠檢測其含量待測定的成分；終止該反應的同時或其后，溶解所述凝集級分；并再測量由該反應所引起的變化。

另外，日本專利號2913608公開了一種將樣品中的第一類脂蛋白從該樣品中的第二類脂蛋白中分離出來的方法。具體地，該方法涉及利用用于選擇性化學沉淀的試劑來沉淀第二類脂蛋白，使該樣品與磁反應性粒子(該磁反應性粒子誘發脂蛋白的沉降，所述脂蛋白已經隨著所述粒子的沉降而沉淀)接觸，將該樣品置于磁場中直到所述磁反應性粒子沉降，從而沉降第二類沉淀的脂蛋白，并且因而容許第一類脂蛋白保留在該樣品的上清液中。在這種方法的情形中，向脂蛋白添加沉淀劑如葡聚糖硫酸鹽和磁性粒子引起除特定脂蛋白級分外的級分的沉淀。其次，當引起磁體作用于該產物，磁性粒子與該沉淀物形成混合物。該磁性粒子和該沉淀物共同沉淀并分離。所述磁性粒子是與脂蛋白不反應的磁體。最后，測定保留在上清液中的特定級分中膽固醇的含量。