[發(fā)明專(zhuān)利]由基質(zhì)和血清組成的無(wú)細(xì)胞移植物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680018571.1
• 申請(qǐng)日: 2006-06-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101184450A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M·西廷格爾;E·坦措斯;C·卡普斯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 特蘭斯逖修科技有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61F2/08
• 分類(lèi)號(hào): A61F2/08;A61L27/36
• 代理公司: 永新專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

本發(fā)明涉及用于再生組織，特別是用于再生軟骨的無(wú)細(xì)胞移植物，涉及生產(chǎn)所述無(wú)細(xì)胞移植物的方法以及所述移植物用于再生組織的用途。

背景技術(shù)

軟骨是一種源自結(jié)締組織的中胚層組織形式，其是由多能的、未分化的、間充質(zhì)前體細(xì)胞生成的。三種類(lèi)型的軟骨即透明軟骨、彈力軟骨和纖維軟骨之間有所不同。透明軟骨是最常見(jiàn)的軟骨形式，例如其存在于關(guān)節(jié)表面。磨損或損傷所引起的軟骨缺損是非常普遍的醫(yī)學(xué)問(wèn)題。因?yàn)檐浌潜桓綦x于人體的傳統(tǒng)的炎癥和修復(fù)系統(tǒng)之外，所以軟骨只有非常弱的自我愈合的能力。因此，在過(guò)去(特別是在過(guò)去的數(shù)年里)已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了多種方法和技術(shù)，用作替代關(guān)節(jié)軟骨的軟骨和骨軟骨區(qū)域的手段。例如，已經(jīng)用骨膜、軟骨膜、異體的和自體的骨軟骨移植物、異體的半月板或由合成材料制成的假體替代關(guān)節(jié)軟骨。

在涉及軟骨細(xì)胞的自體移植的情況中，將從患者中取得的軟骨細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，將其再重新放回到患者體內(nèi)?？梢酝ㄟ^(guò)各種不同的移植物形式將所述軟骨細(xì)胞放回到患者體內(nèi)，實(shí)例包括別注射到關(guān)節(jié)內(nèi)的注射溶液、與軟骨細(xì)胞一起注射的基質(zhì)等等。

例如，專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)WO?97/15655描述了人工組織，其包括三維細(xì)胞外基質(zhì)和經(jīng)遺傳學(xué)加工處理過(guò)的細(xì)胞，基質(zhì)能夠釋放免疫抑制因子或細(xì)胞分化因子。這些基質(zhì)優(yōu)選地是聚合物絨狀物形式，通過(guò)所述基質(zhì)可以分布細(xì)胞懸浮液，所述懸浮液可以被懸浮于纖維蛋白原溶液內(nèi)。也可以向基質(zhì)中加入生長(zhǎng)和/或分化過(guò)程所必需的相應(yīng)細(xì)胞外基質(zhì)的因子或組分。為了將細(xì)胞保持于基質(zhì)內(nèi)，可以通過(guò)添加凝血酶固化細(xì)胞懸浮液，據(jù)此形成最終的移植物。

專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)DE?44?31?598描述了生產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)物植入物的方法，其中首先包裹其中被施加了細(xì)胞的三維支持結(jié)構(gòu)，然后灌注營(yíng)養(yǎng)液?？稍傥盏奈Ⅲw被摻入到支持結(jié)構(gòu)內(nèi)，當(dāng)它們被再吸收時(shí)，其可釋放出影響組織形成的因子。

專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)DE?43?06?661描述了一種三維支持結(jié)構(gòu)，優(yōu)選地是由聚合物絨狀物制成，細(xì)胞被摻入于其中。然后向支持物結(jié)構(gòu)灌注營(yíng)養(yǎng)液，以便促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)以及促進(jìn)細(xì)胞生成細(xì)胞外基質(zhì)。為了阻止細(xì)胞遷移或流出，用瓊脂糖包裹支持結(jié)構(gòu)。

專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)DE?101?39?783也闡述了基質(zhì)細(xì)胞在滑液中的用途。如果需要，該組合物也可以被施加于支持物例如絨狀物或塑料，并以這種形式用作移植物。另外，滑液中的細(xì)胞懸浮液被照此注射到相關(guān)的關(guān)節(jié)內(nèi)。

或者，合成事實(shí)上不含有任何細(xì)胞的基質(zhì)結(jié)構(gòu)。例如，專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)US?2003/0003153描述了含有一種或多種適合于細(xì)胞生長(zhǎng)的結(jié)構(gòu)形成性蛋白的硬基質(zhì)膜。合適的蛋白例如是膠原。所形成的膜形式的基質(zhì)可以與細(xì)胞一起被注射或它們自身可以被移植。在后一種情況中，推測(cè)來(lái)自機(jī)體自身組織的細(xì)胞可以遷移到基質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)。例如通過(guò)傳統(tǒng)的Pridie穿刺或微破損方式可以實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。利用這些技術(shù)，對(duì)關(guān)節(jié)骨進(jìn)行深達(dá)骨髓的小穿刺或破損。流經(jīng)穿刺處的血液流入到缺損處，因此缺損處填充滿了血液移植物。所述移植物含有經(jīng)合適動(dòng)員物刺激的間充質(zhì)前體細(xì)胞，其能形成軟骨類(lèi)型的替代組織即所謂的纖維軟骨。如果基質(zhì)材料被放置到Pridie穿刺處之上，血細(xì)胞能夠遷移到該基質(zhì)材料內(nèi)，并在該處存活。

專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)DE?199?57?388和WO?2005/014027利用了這種作用并通過(guò)在基質(zhì)結(jié)構(gòu)中摻入生長(zhǎng)和分化因子(DE?199?57?388)或趨化因子(WO?2005/014027)作為募集工具可以強(qiáng)化這種作用。所有因子預(yù)期都能造成對(duì)軟骨形成間充質(zhì)前體細(xì)胞的強(qiáng)化募集，最終的目標(biāo)是更快地再生出軟骨。

最后，專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)WO?02/00272闡述了從血液和聚合物成分生成合適的移植物的可能性。該文件所解決的潛在問(wèn)題是利用Pridie穿刺形成的標(biāo)準(zhǔn)的血液移植物在凝血時(shí)收縮并因此會(huì)改變其形狀的事實(shí)。所添加的聚合物阻止了這種形狀變化，并因此容許其真正地愈合成形。為了生成所述移植物，將聚合物和血液或血液組分例如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板、纖維蛋白原、凝血酶和富含血小板的血漿混合，并將其引入到缺損處。但是如果使用血液組分，能夠凝血的材料的存在是實(shí)現(xiàn)所需作用的重要因素。

由殼聚糖(Chitosan)和軟骨細(xì)胞制成的移植物可以作為另一種選擇。當(dāng)如上所述將細(xì)胞引入到缺損處時(shí)，可以無(wú)需添加用于吸引目的的物質(zhì)和/或生長(zhǎng)和分化因子。