[發(fā)明專利]改進的聚合酶有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680016045.1 | 申請日： | 2006-05-10 |
| 公開（公告）號： | CN101180390A | 公開（公告）日： | 2008-05-14 |
| 發(fā)明（設計）人： | 托拜厄斯·威廉·巴爾·奧斯特;杰弗里·保羅·史密斯;尚卡爾·巴拉蘇布拉馬尼亞姆;羅伯托·里加蒂;拉克爾·馬里亞·桑切斯 | 申請（專利權(quán)）人： | 索萊克薩有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/12 | 分類號： | C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 劉曉東;顧晉偉 |
| 地址： | 英國艾*** | 國省代碼： | 英國;GB |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 改進 聚合 | ||
1.改變的聚合酶，其與DNA的親和力降低，從而使所述聚合酶與對照聚合酶相比能夠在每個反應循環(huán)中將核苷酸摻入多個分開的DNA模板中。
2.改變的聚合酶，其與DNA的親和力降低，從而使所述聚合酶與對照聚合酶相比能夠在每個反應循環(huán)中形成數(shù)目增加的生產(chǎn)性聚合酶-DNA復合物。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的聚合酶，其中對照聚合酶與所述聚合酶的類型相同。
4.權(quán)利要求1至3中任一項的聚合酶，其中所述對照聚合酶包含功能等價于9°N?DNA聚合酶氨基酸序列中Leu408Tyr、Tyr409Ala和Pro410Val的替換突變。
5.權(quán)利要求4的聚合酶，其中所述對照聚合酶還包含功能等價于9°NDNA聚合酶氨基酸序列中Cys223Ser的替換突變。
6.權(quán)利要求4或5的聚合酶，其中所述對照聚合酶為9°N?DNA聚合酶。
7.前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述改變包含所述聚合酶中殘基的至少一個突變，所述殘基穩(wěn)定該聚合酶與DNA的相互作用。
8.前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述改變包含所述聚合酶中殘基的至少一個突變，所述殘基與DNA結(jié)合。
9.前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述改變包含所述聚合酶DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域中殘基的至少一個突變。
10.前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述改變包含所述聚合酶中堿性氨基酸殘基的至少一個突變。
11.前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述改變包含至少一個替換突變。
12.權(quán)利要求11的聚合酶，其包含兩個替換突變。
13.前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述聚合酶為DNA聚合酶。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的聚合酶，其中所述DNA聚合酶為B家族類型DNA聚合酶。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的聚合酶，所述聚合酶選自任何B家族古細菌DNA聚合酶、人DNA聚合酶α或T4、RB69和φ29噬菌體DNA聚合酶。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的B家族古細菌DNA聚合酶，其選自Vent、Deep?Vent、9°N和Pfu聚合酶。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的聚合酶，其中所述B家族古細菌DNA聚合酶為9°N聚合酶。
18.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其中所述聚合酶與核苷酸的親和力和/或該聚合酶的保真度基本不受所述改變的影響。
19.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的聚合酶，其在功能等價于9°N?DNA聚合酶氨基酸序列中Lys705、Arg713和/或Arg743的位置上包含一個、兩個或三個替換為不同氨基酸的氨基酸替換突變。
20.改變的聚合酶，其在功能等價于9°N?DNA聚合酶氨基酸序列中Lys705、Arg713和/或Arg743的位置上包含一個、兩個或三個替換為不同氨基酸的氨基酸替換突變。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的聚合酶，其在功能等價于9°N?DNA聚合酶氨基酸序列中Arg713或Arg743的位置上包含至少一個替換為不同氨基酸的氨基酸替換突變。
22.前述任一權(quán)利要求的改變聚合酶，其在功能等價于9°N?DNA聚合酶氨基酸序列中Arg606和/或His679的位置上包含一個或兩個替換為不同氨基酸的氨基酸替換突變。
23.改變的聚合酶，其在功能等價于9°N?DNA聚合酶氨基酸序列中Arg606和/或His679的位置上包含一個或兩個替換為不同氨基酸的氨基酸替換突變。
24.改變的聚合酶，其在功能等價于RB69?DNA聚合酶氨基酸序列中Lys790、Lys800、Arg806、Lys844、Lys874和/或Lys878的位置上包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個替換為不同氨基酸的氨基酸替換突變。
25.根據(jù)權(quán)利要求19至24中任一項的聚合酶，其中所述替換突變將被替換的氨基酸轉(zhuǎn)換為非堿性氨基酸。
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