[發明專利]通過合理修飾互補決定區殘基使免疫球蛋白可變區人源化的方法

無效

• 申請號: 200680015427.2
• 申請日: 2006-03-06
• 公開（公告）號: CN101171263A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 亞歷克西·A·盧戈夫斯科伊;卡爾·漢夫;李佑;肯尼思·西蒙;赫爾曼·范弗利曼
• 申請（專利權）人: 比奧根艾迪克MA公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 閔丹;封新琴

1.免疫球蛋白(Ig)可變區的人源化方法，所述可變區包含：a)來自受體Ig可變區的可變區框架(FR)氨基酸殘基和b)來自非人供體Ig可變區的互補決定區(CDR)，所述方法包括，

i)提供能預測至少一個CDR的三維構象的信息；

ii)鑒定出預計影響所述至少一個CDR的三維構象的FR氨基酸殘基；

iii)鑒定出至少一個可用選定氨基酸殘基取代的候選供體CDR氨基酸殘基，其中所述選定氨基酸殘基在構象上適應供體Ig可變區與受體Ig可變區之間的FR氨基酸殘基差異且不影響該CDR的構象；和

iv)用所述選定氨基酸殘基取代所述至少一個候選供體CDR氨基酸殘基，形成人源化Ig可變區。

2.權利要求1的方法，其中步驟(iii)還包括，鑒定出至少一個可以用第二種選定氨基酸殘基取代的候選受體FR殘基，其中所述第二種選定氨基酸殘基在構象上適應供體Ig可變區與受體Ig可變區之間的FR氨基酸殘基差異且不影響該CDR的構象。

3.權利要求2的方法，其中步驟(iv)還包括，用第二種選定氨基酸殘基取代至少一個候選受體FR殘基。

4.權利要求1的方法，其中步驟(i)包括評價該非人供體Ig可變區的三維(3D)結構。

5.權利要求1的方法，其中步驟(i)包括評價該非人供體Ig可變區的x-線衍射數據。

6.權利要求1的方法，其中步驟(i)包括評價該非人供體Ig可變區的計算機模型。

7.設計人源化Ig可變區的方法，所述可變區包含：a)來自受體Ig可變區的可變框架區(FR)和b)來自非人供體Ig可變區的互補決定區(CDR)，所述方法包括，

(a)鑒定出在受體Ig可變區和供體Ig可變區之間不同的框架區(FR)氨基酸；

(b)鑒定出與步驟(a)所鑒定的FR氨基酸鄰接的氨基酸；

(c)從步驟(b)所鑒定的氨基酸中，鑒定出至少一個可以用選定氨基酸殘基取代的候選氨基酸，所述選定氨基酸殘基在構象上適應步驟(a)所鑒定的FR氨基酸。

8.權利要求7的方法，其中步驟(a)所鑒定的FR氨基酸是規范FR殘基。

9.權利要求7的方法，其中步驟(b)所鑒定的氨基酸與步驟(a)所鑒定的FR氨基酸緊鄰。

10.權利要求7的方法，其中步驟(b)所鑒定的氨基酸在與步驟(a)所鑒定的FR氨基酸相距約4的3D空間范圍內。

11.權利要求7的方法，其中選定氨基酸殘基通過側鏈改裝鑒定。

12.權利要求11的方法，其中選定氨基酸殘基是從所有可能氨基酸的所有可能轉異構體選出的。

13.權利要求11的方法，其中選定氨基酸殘基是從所有可能氨基酸的所有可能轉異構體的子集選出的。

14.權利要求7的方法，其中選定氨基酸殘基被鑒定為，在一組具有與步驟(a)所鑒定的FR氨基酸相同的FR氨基酸的同源抗體可變區序列中，所述候選氨基酸的位置上最常見的氨基酸。

15.權利要求11的方法，其中子集包含，在一組具有與步驟(a)所鑒定的FR氨基酸相同的FR氨基酸的同源抗體可變區序列中位于所述候選氨基酸的位置上的最常見的氨基酸的所有可能旋轉異構體。

16.權利要求7的方法，還包括在所述候選氨基酸位置取代所述選定氨基酸殘基。

17.設計人源化Ig可變區的方法，包括，

a)選擇非人供體Ig可變區；

b)選擇受體Ig可變區；

c)在所述供體Ig可變區中鑒定出至少一個可用選定氨基酸殘基取代的候選CDR氨基酸殘基，其中：

(i)所述候選CDR氨基酸殘基緊鄰所述受體Ig可變區的FR氨基酸殘基；或

(ii)所述候選CDR氨基酸殘基預計具有一種側鏈原子、并預計與所述人源化Ig鏈的至少一個可變區FR氨基酸殘基相互作用，其中所述側鏈原子的范德華表面是在免疫球蛋白3D模型中與所述受體Ig可變區的FR氨基酸殘基相距約4的范圍內。