[發明專利]反轉探針及其用于核酸檢測的用途

無效

• 申請號: 200680015316.1
• 申請日: 2006-05-03
• 公開（公告）號: CN101189347A
• 公開（公告）日: 2008-05-28
• 發明（設計）人: 詹姆斯·M·庫爾;勞倫斯·A·哈夫;喬舒亞·A·比特科;李小玉;亞歷山大·F·洛瑟博格;拉里·W·麥克勞克林
• 申請（專利權）人: 通信探索公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 肖善強

1.將核酸探針從靶核酸序列中分離的方法，所述方法包含步驟：

(a)將核酸探針與懷疑含有所述靶核酸序列的樣品在下述條件下組合，如果所述樣品中存在所述靶核酸，則所述條件允許所述探針與所述靶核酸序列退火，其中所述核酸探針包含化學基團，所述化學基團被修飾或去除時允許所述核酸探針或其片段形成發夾結構并從所述復合物解離；和

(b)提供能夠修飾或去除所述化學基團的試劑，從而如果所述樣品中存在復合物，則所述核酸探針或其片段形成發夾結構并從所述復合物解離。

2.權利要求1的方法，其包含檢測步驟(b)所產生的、指示所述復合物存在的產物，從而測定所述樣品中是否存在所述靶核酸的額外步驟。

3.權利要求1的方法，其中所述發夾結構含有一個莖。

4.權利要求1、2或3任一項的方法，其中在步驟(b)中，所述試劑去除所述化學基團。

5.權利要求1、2或3任一項的方法，其中在步驟(b)中，所述試劑修飾化學基團。

6.權利要求1-5中任一項的方法，其中核酸探針在所述化學基團附近被切割。

7.權利要求1-6中任一項的方法，其中所述核酸探針包含一個被屏蔽的巰基鍵。

8.權利要求7的方法，其中所述核酸探針包含一個被含二硫鍵基團屏蔽的巰基鍵。

9.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述試劑包含與所述靶核酸序列互補的核酸序列。

10.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述試劑與能夠與所述靶核酸序列退火的第二核酸序列連接，使得當所述第二核酸序列與所述靶核酸序列退火時，所述試劑修飾或去除所述核酸探針中含有的所述化學基團。

11.權利要求10的方法，其中第二核酸序列與所述靶核酸序列的第一位置退火，所述核酸探針在靶核酸序列的第二位置退火。

12.權利要求11的方法，其中所述第一和第二位置彼此相鄰。

13.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述試劑包含與所述核酸探針互補的核酸序列。

14.權利要求1-13中任一項的方法，其中所述試劑包含選自以下試劑組的試劑：金屬、還原劑、螯合劑、親核體、親核化合物、親電體、親電化合物、催化肽、催化小分子、蛋白酶、核酶或誘導化學轉化的蛋白質。

15.權利要求1-14中任一項的方法，其中所述化學基團選自堿基、經修飾的堿基、寡核苷酸、經修飾的寡核苷酸、核苷酸間鍵、經修飾的核苷酸間鍵、保護性基團、肽、蛋白質、多聚體、珠和納米粒子。

16.權利要求1-15中任一項的方法，其中所述核酸探針還包含可檢測的標簽。

17.權利要求16的方法，其中步驟(b)中所述化學基團的修飾或去除引起所述可檢測的標簽產生可檢測的信號。

18.權利要求1-17中任一項的方法，其中所述核酸探針或所述靶核酸與一配體偶聯。

19.權利要求1-18中任一項的方法，其中所述化學基團是含硫的核苷酸間鍵。

20.檢測樣品中靶核酸序列存在與否的方法，所述方法包含步驟：

(a)將能夠與所述靶核酸序列退火形成復合物的核酸探針與懷疑含有所述靶核酸序列的樣品組合，其中所述核酸探針包含化學基團，所述化學基團被修飾或去除時允許所述核酸探針或其片段形成發夾結構并從所述復合物解離；和

(b)提供能夠修飾或去除所述化學基團的試劑，從而如果所述樣品中存在復合物，則所述核酸探針或其片段形成發夾結構并從所述復合物解離；和

c)檢測步驟(b)所產生的、指示所述復合物存在的產物，從而測定所述樣品中是否存在所述靶核酸。

21.權利要求20的方法，其中發夾結構包含莖。

22.權利要求20或21的方法，其中在步驟(b)中，所述試劑去除所述化學基團。

23.權利要求20或21的方法，其中在步驟(b)中，所述試劑修飾所述化學基團。