[發(fā)明專利]檢測HPV的方法及探針，引物和試劑盒無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680008504.1 | 申請日： | 2006-01-17 |
| 公開（公告）號： | CN101160414A | 公開（公告）日： | 2008-04-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | B·D·A·科勞;G·E·M·克勒特;W·G·昆特;D·C·J·G·范阿勒維克;H·A·M·范登蒙克霍夫;L·J·范多恩 | 申請（專利權(quán)）人： | 代夫特診斷實驗室公司;葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 李波;梁謀 |
| 地址： | 荷蘭*** | 國省代碼： | 荷蘭;NL |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 hpv 方法 探針 引物 試劑盒 | ||
1.對可能存在于生物樣品中的任意HPV核酸進(jìn)行檢測和/或分型的方法，所述方法包含下述步驟：
(i)擴增樣品中的多核酸片段，其包含任意HPV核酸的B區(qū)域或由它組成，所述B區(qū)域表示在圖1中，和
(ii)使來自步驟(i)的任意擴增的片段接觸至少一種能與HPV的B區(qū)域特異性地雜交的探針，所述B區(qū)域表示在圖1中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中樣品中的擴增的多核酸片段包含任意HPV核酸的D區(qū)域或由它組成，所述D區(qū)域表示在圖1中。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中使來自步驟(i)的任意擴增的片段接觸至少一種能與HPV的D區(qū)域特異性地雜交的探針，所述D區(qū)域表示在圖1中。
4.根據(jù)任一項前述權(quán)利要求的對可能存在于生物樣品中的HPV進(jìn)行檢測和/或分型的方法，所述方法包含：
(i)使用下述引物，擴增HPV的多核酸片段：
-5’引物，其特異性地雜交于HPV?16的基因組的‘A’區(qū)域，所述‘A’區(qū)域表示在圖1中，和
-3’引物，其特異性地雜交于至少一種HPV類型的基因組的‘C’區(qū)域，所述‘C’區(qū)域表示在圖1中；
(ii)使來自步驟(i)的擴增的片段與至少一種探針雜交，所述探針能與HPV的‘B’區(qū)域或‘D’區(qū)域特異性地雜交，所述區(qū)域表示在圖1中。
5.根據(jù)任一項前述權(quán)利要求的方法，其中所述探針能特異性地雜交僅一種HPV類型的基因組的D或B區(qū)域。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述探針選自在表4，5-14，17，18，19中或在任意實施例中列出的序列組成的列表。
7.根據(jù)任一項前述權(quán)利要求的方法，其中所述擴增步驟使用選自下組的引物：HPV-MPF1F1，HPV-MPF1F2，HPV-MPF1F3，HPV-MPF1F4，HPV-MPF1F5，HPV-MPF1F6，HPV-MPF1F7，HPV-MPF1F8，HPV-MPF1F9，HPV-MPF1F10，HPV-MPF2R1，HPV-MPF2R2，HPV-MPF2R3，HPV-MPF2R4，HPV-MPF2R5，HPV-MPF2R6，HPV-MPF2R7，HPV-MPF2R8。
8.根據(jù)任一項前述權(quán)利要求的方法，其中在分型步驟之前，證實樣品中存在HPV核酸。
9.根據(jù)任一項前述權(quán)利要求的方法，其中探針和靶之間的雜交在有固體支持物存在下進(jìn)行。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述雜交步驟使用反向雜交形式。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述探針直接或間接附著在珠子上，任選熒光珠。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中使用流式細(xì)胞術(shù)分析雜交的檢測。
13.包含至少2種引物的試劑盒，所述引物適用于擴增來自HPV基因組的B或D區(qū)域的核酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的試劑盒，其中所述引物選自：HPV-MPF1F1，HPV-MPF1F2，HPV-MPF1F3，HPV-MPF1F4，HPV-MPF1F5，HPV-MPF1F6，HPV-MPF1F7，HPV-MPF1F8，HPV-MPF1F9，HPV-MPF1F10，HPV-MPF2R1，HPV-MPF2R2，HPV-MPF2R3，HPV-MPF2R4，HPV-MPF2R5，HPV-MPF2R6，HPV-MPF2R7和HPV-MPF2R8。
15.包含至少2種探針的試劑盒，所述探針能特異性地雜交于HPV基因組的D區(qū)域或B區(qū)域。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的試劑盒，其中所述探針是選自表4，5-14，17，18，19中的任一個或任意實施例的任意2種探針。
17.試劑盒，其包含表1或2的任意引物、或表3的任意探針、和用于實現(xiàn)上述HPV鑒別和分型分析的方法的說明書。
18.試劑盒，其包含附著在固體支持物上的能特異性地雜交于HPV基因組的D區(qū)域或B區(qū)域的探針。
19.根據(jù)權(quán)利要求13-17之一的試劑盒，其另外包含表3的任意探針。
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