[發明專利]寡核苷酸及其衍生物的脫保護和純化

無效

• 申請號: 200680008023.0
• 申請日: 2006-01-12
• 公開（公告）號: CN101137662A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: 錢德拉·瓦吉斯;克里斯托弗·謝弗
• 申請（專利權）人: 西爾納醫療公司
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C12N15/10
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 封新琴;巫肖南

1.一種方法，其包括步驟：

a)合成包含一個或多個核糖核苷酸的核酸分子，使用選自下組的方法：基于固相亞磷酰胺、溶液相亞磷酰胺、固相H-膦酸酯、溶液相H-膦酸酯、混合相亞磷酰胺和混合相H-膦酸酯的合成方法；

b)在適合于從所述分子去除任何2’-氨基保護基團、環外氨基(堿基)保護基團和/或磷酸保護基團的條件下，將來自步驟(a)所述核酸分子與含水烷基胺、三烷基胺或烷基胺和三烷基胺接觸，所述保護基團可以獨立地存在或不存在。

c)將具有來自步驟(b)的核酸分子的反應混合物與極性溶劑和三烷基胺·氫氟化物在適合于去除2’-OH保護基團的條件下接觸；

d)將具有所述核酸分子的來自步驟(c)的反應混合物加樣到在合適的緩沖液中的選自下組的介質上：Pharmacia?Source?Q15、Biorad?Macroprep?25Q、Pharmacia?Q-sepharose、Perceptive?POROS?HQ、TOSOHAAS?Q-5PW-HR、Q-5PW和超級Q-5PW介質，所述緩沖液包含選自下組的緩沖液：水、大約20mM磷酸鈉和大約0.1M?NaCl中的20％乙醇和大約20mM磷酸鈉和大約0.1M?NaCl中的乙腈；

e)使用合適的洗脫緩沖液施加純化梯度，分析級分并且使得純級分能夠匯集和脫鹽。

2.權利要求1的方法，其中包含一個或多個核糖核苷酸的所述核酸分子是siRNA分子。

3.權利要求2的方法，其中所述siRNA分子還包含一種或多種2’-脫氧-2’-氟核苷酸。

4.權利要求1的方法，其中所述含水烷基胺是含水甲胺。

5.權利要求1的方法，其中所述含水烷基胺是40％的含水甲胺。

6.權利要求1的方法，其中所述三烷基胺·三氫氟化物是三乙胺·三氫氟化物(TEA·3HF)。

7.權利要求1的方法，其中所述2’-OH保護基團包含叔丁基二甲基甲硅烷(TBDMSi)保護基團及其衍生物。

8.權利要求1的方法，其中所述核酸分子包含一種或多種化學修飾。

9.一種純化核酸分子的方法，其包括步驟：

a)將所述核酸分子加樣到加樣緩沖液中的介質上，所述介質選自下組：Pharmacia?Source?Q15、Biorad?Macroprep?25Q、Pharmacia?Q-sepharose、Perceptive?POROS?HQ、TOSOHAAS?Q-5PW-HR、Q-5PW和超級Q-5PW介質，所述加樣緩沖液包含選自下組的緩沖液：水、大約20mM磷酸鈉和大約0.1MNaCl中的20％乙醇和大約20mM磷酸鈉和大約0.1M?NaCl中的乙腈；

b)使用合適的洗脫緩沖液施加純化梯度，分析級分并且使得純級分能夠匯集和脫鹽。

10.權利要求9的方法，其中所述核酸分子包含一個或多個核糖核苷酸。

11.權利要求10的方法，其中所述核酸分子包含一種或多種化學修飾。

12.權利要求1或10的方法，其中所述核酸分子是單鏈核酸分子。

13.權利要求1或10的方法，其中所述核酸分子是雙鏈核酸分子。

14.權利要求13的方法，其中所述雙鏈核酸分子包含一種或多種化學修飾。

15.權利要求13的方法，其中所述雙鏈核酸分子各鏈的長度在19和23個核苷酸之間。

16.權利要求12的方法，其中所述雙鏈核酸分子各鏈的長度在19和23個核苷酸之間。

17.權利要求8或11的方法，其中所述化學修飾是糖修飾。

18.權利要求17的方法，其中所述糖修飾是2’-糖修飾。

19.權利要求8或11的方法，其中所述化學修飾是堿基修飾。

20.權利要求8或11的方法，其中所述化學修飾是磷酸酯骨架修飾。

21.權利要求20的方法，其中所述磷酸酯骨架修飾是硫代磷酸酯。

22.權利要求8或11的方法，其中所述化學修飾是末端修飾。