[發(fā)明專利]HIV Vif突變體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680007402.8
• 申請日: 2006-03-07
• 公開（公告）號: CN101137666A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發(fā)明（設計）人: C·博沃倫塔
• 申請（專利權）人: 莫爾梅德股份有限公司
• 主分類號: C07K14/16
• 分類號: C07K14/16;A61K38/16
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 郭文潔;梁謀

發(fā)明領域

本發(fā)明涉及慢病毒載體，及其用于對包括HIV重復感染在內的HIV感染賦予抗性的方法。

發(fā)明背景

在發(fā)展中國家，AIDS是導致死亡的一個主要因素，它的蔓延呈全國性爆發(fā)趨勢?？墒?，距根除HIV-1仍很遙遠。目前，高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)是唯一有效降低AIDS散播及蔓延的療法，盡管其長期使用會帶來諸如要遵守復雜的給藥方案、副作用毒性以及花費增加這樣的缺點及局限(Richman?et?al，2001)。HIV-1由于其基因組的超突變率、以及缺乏順從性所導致的亞型內及亞型間很大程度的遺傳與抗原的變異，是其對HAART藥物產生抗性、以及開發(fā)基于多類群的預防性疫苗出現(xiàn)多次失敗的原因(Ho?et?al，2002)。基于此，有必要發(fā)展出針對AIDS的替代和/或附加治療策略。

多年的臨床前研究已經表明，可以在很多水平上干擾HIV-1的生命周期，并至少在概念上證實了抗HIV基因療法(Buchschacher?et?al，2001)?？捎谩┤纾苯俞槍Σ《九c細胞內基因的編碼核酶的基因、誘餌、反義及小干擾RNA(SiRNA)分子(Buchschacher?et?al，2001；Jacqueet?al，2002；Novina?et?al，2002；Lee?et?al，2002；Coburn?et?al，2002；Qin?et?al，2003)，或者諸如細胞內趨化因子、毒素及單鏈抗體這樣的蛋白對造血干細胞(HSCs)、T細胞前體或者T淋巴細胞進行遺傳改造。然而，用表達病毒蛋白反式顯性突變體或者抗HIV-1核酶的載體所轉導的T淋巴細胞的早期臨床實驗令人沮喪(Woffendin?et?al，1996；Ranga?et?al，1998；Wong-Staal?et?al，1998)——這主要是由于基因轉移效率低下、結合不充分以及經遺傳改造后的T細胞在體內存活時間短造成的。迄今為止所進行的絕大多數臨床前及臨床研究，都是基于使用來源于莫洛尼小鼠白血病病毒(MLV)的逆轉錄病毒載體來轉導HSCs或者T細胞的。然而，來源于MLV的載體在臨床應用上表現(xiàn)出明顯的局限，譬如轉導未分裂的HSCs及T細胞的效率低、潛在的治療用抗HIV產物的表達不充分、以及有通過對癌基因的插入激活而誘發(fā)瘤形成的傾向(Baum?et?al，2003)。

病毒感染因子(vif)基因的產物是抗HIV基因療法的可能靶標。vif是HIV-1四個附屬基因之一，在病毒復制晚期以Rev依賴的方式表達(Cullen?et?al，1998；Frankel?et?al，1998)。Vif蛋白對在被稱為“非允許細胞(non-permissive?cell)”的包括HIV-1的天然靶點(T細胞和巨噬細胞)以及某些T細胞系，例如CEM、H9和HUT78中進行高度病毒感染而言是必需的。這種需求依賴于Vif抵消最近鑒定的CEM15/APOBEC-3G蛋白(Sheehy?et?al，2002)的功能的能力，所述的CEM15/APOBEC-3G蛋白提供針對HIV-1的先天免疫力。因此，Vif功能的喪失或者受阻，可以提供一種不同的抗HIV-1治療途徑。

F12-vif是vif的一個天然突變體，其具有15個特有的氨基酸替代，最初在HIV-1的F12非生產突變體中發(fā)現(xiàn)(Federico?et?al，1989；Carlini?etal，1992；Carlini?et?al，1996)。F12非生產HIV在重復感染HIV的復制中引發(fā)了阻礙，并且F12-Vif在降低該生產系的感染方面發(fā)揮作用。然而，需要進一步提供具有抗HIV活性的vif突變體，并提供有效遞送這些突變體的系統(tǒng)。本發(fā)明用以攻克這些問題。

發(fā)明概要

我們已經開發(fā)出vif的新突變體，于體外在感染了HIV-1的T細胞系中可以高效抑制HIV-1的復制。特別地，我們發(fā)現(xiàn)在與野生型序列中127、128、130、131、132和142位相對應的氨基酸處含有替代氨基酸的Vif蛋白，可針對HIV充分發(fā)揮出抗病毒作用。此外，我們表明，F(xiàn)12-Vif的一個嵌合在WT-Vif內、僅具有6個特有的氨基酸替代的45個氨基酸的區(qū)域(Chim3)，可保護人T淋巴細胞免受HIV-1感染。而且，我們證明了同F(xiàn)12-Vif相比，Chim3不能在非允許細胞中恢復Vif缺陷病毒體(ΔvifHIV-1)的復制，這使得以沉默方式攜帶有ΔvifHIV-1準種的病人在使用該突變體時更加安全。