[發(fā)明專利]人乳清酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶蛋白質(zhì)的測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680006980.X
• 申請(qǐng)日: 2006-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN101133085A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 坂本一樹;杉本芳一
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大鵬藥品工業(yè)株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;G01N33/537
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 龍淳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種針對(duì)人乳清酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶的新的抗體以及使用該抗體測(cè)定人乳清酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶蛋白質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

乳清酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(orotate?phosphoribosyl?transferase；EC2.4.2.10，以下簡(jiǎn)稱為“OPRT”)是催化由乳清酸生成尿苷一磷酸(UMP)的反應(yīng)的酶，具有供給核酸合成中必需的嘧啶核苷酸的作用，是一種核酸前體供給途徑的主要限速酶之一。因此，已知其在細(xì)胞增殖旺盛的腫瘤組織或消化道上皮中活性很高。

另外，已知5-氟尿嘧啶類的抗癌劑由于發(fā)揮出將OPRT作為限速酶活化的抗腫瘤效果，對(duì)于在腫瘤細(xì)胞中OPRT量多的患者其效果是比較大的，被認(rèn)為具有顯著的延長(zhǎng)生命的效果，但對(duì)于OPRT量少的患者則效果很小(參照非專利文獻(xiàn)1)。因此，在例如對(duì)腫瘤患者進(jìn)行治療時(shí)，預(yù)先測(cè)定摘除腫瘤中的OPRT量就成為確定治療方法、選擇給藥的抗癌劑的指標(biāo)，其重要性是非常高的。

目前，組織中的人OPRT的定量是通過(guò)測(cè)定mRNA的量或酶活性來(lái)進(jìn)行的。可是，由于轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)機(jī)制等原因，有可能mRNA量的測(cè)定并不能充分反映蛋白質(zhì)的量和酶活性。另外，通過(guò)測(cè)定酶活性進(jìn)行的定量由于主要采用放射性標(biāo)記的底物，其操作非常繁雜。將人OPRT的定量法應(yīng)用于臨床診斷或治療時(shí)，簡(jiǎn)便而且正確是非常重要的，因此，迫切希望開發(fā)出這樣的定量方法。

非專利文獻(xiàn)1：Br.J.Cancer.，2003，Oct，20；89(8)：1486-92.

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：提供一種簡(jiǎn)便并且正確地測(cè)定人OPRT的方法。

本發(fā)明人制備了針對(duì)人OPRT整體的多克隆抗體和針對(duì)人OPRT氨基酸序列中的各種寡肽的抗體，設(shè)計(jì)將這些抗體進(jìn)行組合的測(cè)定系統(tǒng)，研究發(fā)現(xiàn)，將識(shí)別人OPRT從N末端開始的第86位～第108位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗體與識(shí)別人OPRT從N末端開始的第454位～第474位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗體進(jìn)行組合的人OPRT免疫測(cè)定系統(tǒng)，相比于使用其它抗體的測(cè)定系統(tǒng)，其靈敏度顯著升高，可以簡(jiǎn)便且正確地測(cè)定人OPRT蛋白質(zhì)。從而完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明提供一種識(shí)別人OPRT從N末端開始的第86位～第108位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體。

另外，本發(fā)明還提供一種識(shí)別人OPRT從N末端開始的第454位～第474位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體。

另外，本發(fā)明還提供一種含有識(shí)別人OPRT從N末端開始的第86位～第108位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體和識(shí)別人OPRT從N末端開始的第454位～第474位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體的人OPRT蛋白質(zhì)測(cè)定用試劑盒。

進(jìn)一步，本發(fā)明還提供一種將識(shí)別人OPRT從N末端開始的第86位～第108位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體和識(shí)別人OPRT從N末端開始的第454位～第474位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體進(jìn)行組合使用的人OPRT蛋白質(zhì)的測(cè)定方法。

另外，人OPRT蛋白質(zhì)的氨基酸序列為按照文獻(xiàn)Proceeding?of?theNational?Academy?of?Sciences?of?the?United?States?of?America，Vol.85，No.6，1988，1754-1758上記載的序列。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明的方法，相比于使用將人OPRT整體作為抗原的抗體的情況，和使用識(shí)別人OPRT從N末端第428位～第446位的氨基酸區(qū)域存在的表位的抗人OPRT抗體的情況，可以簡(jiǎn)便且正確地定量人OPRT蛋白質(zhì)。進(jìn)一步，通過(guò)利用本發(fā)明的測(cè)定方法對(duì)檢體的人OPRT蛋白質(zhì)進(jìn)行定量，不但可以進(jìn)行癌癥的診斷、治療效果預(yù)測(cè)，而且還可以選擇治療方法、決定可否給與抗癌劑。

附圖說(shuō)明

圖1為表示抗OPRT抗體的Western?blotting的結(jié)果的圖。

圖2為表示將抗OPRT-A抗體、抗OPRT-B抗體和抗OPRT-C抗體中的2種進(jìn)行組合使用的夾心ELISA系統(tǒng)的結(jié)果。圖中A-B：抗OPRT-A抗體固定化-抗OPRT-B抗體檢測(cè)。圖中B-A：抗OPRT-B抗體固定化-抗OPRT-A抗體檢測(cè)。圖中B-C：抗OPRT-B抗體固定化-抗OPRT-C抗體檢測(cè)。圖中C-A：抗OPRT-C抗體固定化-抗OPRT-A抗體檢測(cè)。圖中C-B：抗OPRT-C抗體固定化-抗OPRT-B抗體檢測(cè)。