[發(fā)明專利]來(lái)自GLUCONOBACTER OXYDANS的醇脫氫酶基因

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680004666.8
• 申請(qǐng)日: 2006-02-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101166821A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 巴斯蒂恩·施韋爾斯;安妮·弗朗索瓦·邁耶;安佳·穆利;奈杰爾·約翰·芒希亞;新城雅子
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/04
• 分類號(hào): C12N9/04;C12P17/04
• 代理公司: 北京東方億思知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 肖善強(qiáng)

1.選自下述組的多核苷酸或此類多核苷酸的互補(bǔ)鏈，所述組由：

(a)編碼包含根據(jù)SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)包含根據(jù)SEQ?ID?NO：1的核苷酸序列的多核苷酸；

(c)包含下述核苷酸序列的多核苷酸，所述核苷酸序列可使用來(lái)自微生物的基因組DNA作為模板，并使用根據(jù)SEQ?ID?NO：3和SEQ?IDNO：4的引物組，通過(guò)例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的核酸擴(kuò)增獲得；

(d)多核苷酸，其包含編碼被(a)至(c)中任一項(xiàng)的多核苷酸編碼的多肽的片段或衍生物的核苷酸序列，其中，在所述衍生物中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基較之所述多肽被保守取代，并且，所述片段或衍生物具有氧化還原酶[EC?1]的活性，優(yōu)選地，具有在供體的CH-OH基團(tuán)上發(fā)揮作用的氧化還原酶[EC?1.1]的活性；

(e)編碼氧化還原酶[EC?1]，優(yōu)選地，編碼在供體的CH-OH基團(tuán)上發(fā)揮作用的氧化還原酶[EC?1.1]的多核苷酸，且其互補(bǔ)鏈能在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與(a)至(d)中任一項(xiàng)所定義的多核苷酸互補(bǔ)；以及

(f)編碼氧化還原酶[EC?1]，優(yōu)選地，編碼在供體的CH-OH基團(tuán)上發(fā)揮作用的氧化還原酶[EC?1.1]的多核苷酸，且其與(a)至(d)中任一項(xiàng)所定義的多核苷酸至少70％相同，例如85％、90％或95％相同；

構(gòu)成。

2.含有權(quán)利要求1所述的多核苷酸的載體。

3.如權(quán)利要求2所述的載體，其中，所述多核苷酸與允許在原核生物宿主細(xì)胞或真核生物宿主細(xì)胞中表達(dá)的表達(dá)控制序列可操作地相連。

4.用權(quán)利要求1所述的多核苷酸或用權(quán)利要求2或3所述的載體遺傳工程改造過(guò)的微生物。

5.如權(quán)利要求4所述的微生物，其能以300mg/l或更多的量從D-山梨糖醇直接生產(chǎn)維生素C，所述的量是在20小時(shí)溫育之后以靜止細(xì)胞方法測(cè)量的。

6.如權(quán)利要求5所述的微生物，其能以800mg/l或更多的量從L-山梨糖直接生產(chǎn)維生素C。

7.如權(quán)利要求1所述的多核苷酸編碼的多肽。

8.用于生產(chǎn)能表達(dá)權(quán)利要求7所述的多肽的細(xì)胞的工藝，其包括下述步驟：用權(quán)利要求2或3所述的載體或用權(quán)利要求1所述的多核苷酸對(duì)細(xì)胞進(jìn)行遺傳工程改造。

9.權(quán)利要求1所述的被打斷的多核苷酸用于生產(chǎn)維生素C的用途。

10.如權(quán)利要求4所述的微生物或含有包含權(quán)利要求1所述的多核苷酸的內(nèi)源基因的微生物，所述微生物經(jīng)過(guò)遺傳改變，所述改變以使得所述微生物對(duì)維生素C的生產(chǎn)的產(chǎn)率和/或效率提高的方式進(jìn)行。

11.如權(quán)利要求10所述的微生物，其生產(chǎn)如權(quán)利要求7所述的多肽，所述多肽具有減少的或消失的氧化還原酶活性[EC?1]，優(yōu)選地，具有減少的或消失的在供體的CH-OH基團(tuán)上發(fā)揮作用的氧化還原酶的活性[EC1.1]。

12.如權(quán)利要求4至6、10或11中任意一項(xiàng)所述的微生物，其中，根據(jù)權(quán)利要求1所述的多核苷酸被打斷。

13.如權(quán)利要求4至6或10至12中任意一項(xiàng)所述的微生物，其選自Pseudomonas、Pantoea、Escherichia、Corynebacterium、Ketogulonicigenium以及乙酸細(xì)菌，例如Gluconobacter、Acetobacter或Gluconacetobacter，優(yōu)選地，Acetobacter?sp.、Acetobacter?aceti、Gluconobacter?frateurii、Gluconobacter?cerinus、Gluconobacterthailandicus、Gluconobacter?oxydans構(gòu)成的組，優(yōu)選地，Gluconobacteroxydans，更優(yōu)選地，Gluconobacter?oxydans?DSM?17078。

14.在微生物中生產(chǎn)打斷的、編碼氧化還原酶[EC?1]，優(yōu)選地，編碼在供體的CH-OH基團(tuán)上發(fā)揮作用的氧化還原酶[EC?1.1]的內(nèi)源基因的工藝，所述微生物包含權(quán)利要求1所述的多核苷酸，所述工藝包括如下步驟：以使得所述微生物對(duì)維生素C的生產(chǎn)的產(chǎn)率和/或效率提高的方式來(lái)改變所述多核苷酸。