[發(fā)明專利]新的疏水蛋白融合蛋白產(chǎn)品、其制備及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680004292.X
• 申請日: 2006-02-07
• 公開（公告）號: CN101115768A
• 公開（公告）日: 2008-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: T·薩布科夫斯基;M·考羅什;H－G·勒邁爾;H·巴爾格;C·博爾施韋勒
• 申請（專利權(quán)）人: 巴斯福股份公司
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所
• 代理人: 黃革生;凌立

本發(fā)明涉及新的疏水蛋白融合蛋白、其制備及用途。

現(xiàn)有技術(shù)

疏水蛋白是大約100個AA的小蛋白質(zhì)，其是絲狀真菌特有的蛋白質(zhì)并且不在其他生物中產(chǎn)生。近年來，在天藍(lán)色鏈霉菌(Streptomycescoelicolor)中發(fā)現(xiàn)了稱作“Chaplin”的疏水蛋白樣蛋白質(zhì)，其同樣具有高表面活性特性。Chaplins可在水-氣界面裝配，從而產(chǎn)生淀粉樣原纖維(amyloid-like?fibrils)(Classen等人，2003?Genes?Dev?1714-1726；Elliot等人2003，Genes?Dev.17，1727-1740)。

疏水蛋白以水不溶性形式分布在各種真菌結(jié)構(gòu)例如氣生菌絲、孢子和子實(shí)體的表面。疏水蛋白的基因分離自子囊菌綱(ascomycetes)、半知菌綱(deuteromycetes)和擔(dān)子菌綱(basidiomycetes)。一些真菌包含不止一種疏水蛋白基因，例如裂褶菌(Schizophyllum?commune)、灰蓋鬼傘(Coprinus?cinereus)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus?nidulans)。很明顯，不同的疏水蛋白參與真菌發(fā)育的不同階段。推測所述疏水蛋白負(fù)責(zé)不同的功能(van?Wetter等人，2000，Mol.Microbiol.，36，201-210；Kershaw等人1998，F(xiàn)ungal?Genet.Biol，1998，23，18-33)。

所描述的疏水蛋白的生物學(xué)功能除了減少水的表面張力以產(chǎn)生氣生菌絲外，其還包括孢子的疏水化(Wsten等人1999，Curr.Biol.，19，1985-88；Bell等人1992，Genes?Dev.，6，2382-2394)。此外，疏水蛋白用于內(nèi)襯地衣的子實(shí)體中的氣體通道(gas?channel)以及通過真菌病原體鑒定植物表面的系統(tǒng)的組分(Lugones等人1999，Mycol.Res.，103，635-640；Hamer?&Talbot?1998，Curr.Opinion?Microbiol.，第1卷，693-697).

互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)已證明可在單一種類內(nèi)一定程度上功能性地取代疏水蛋白。

使用常規(guī)的蛋白質(zhì)-化學(xué)純化和分離方法只可以以適度的產(chǎn)量和純度制備以前公開的疏水蛋白。借助遺傳方法來提供更大量的疏水蛋白的努力迄今也未獲得成功。

發(fā)明目的

本發(fā)明的目的是提供新的疏水蛋白和其生產(chǎn)方法，所述方法使得能夠經(jīng)濟(jì)地生產(chǎn)疏水蛋白并將其用于多種技術(shù)領(lǐng)域。

發(fā)明描述

本發(fā)明涉及通用結(jié)構(gòu)式(I)的多肽

X_n-C¹-X_1-50-C²-X_0-5-C³-X_1-100-C⁴-X_1-100-C⁵-X_1-50-C⁶-X_0-5-C⁷-X_1-50-C⁸-X_m??(I)

其中X可以是20種天然發(fā)生的氨基酸中的任一種(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)，X上的指數(shù)表示氨基酸的數(shù)目，指數(shù)n和m是0和500之間的數(shù)目、優(yōu)選15和300之間的數(shù)目，條件是縮寫為X_n或X_m的肽序列中的至少一個是長度至少為20個氨基酸，天然不與疏水蛋白相連的肽序列，該多肽在包被玻璃表面后接觸角改變至少20°。

由C¹至C⁸表示的半胱氨酸在本發(fā)明的蛋白質(zhì)中以還原形式存在或彼此形成二硫鍵。特別優(yōu)選形成分子內(nèi)C-C鍵，特別是具有至少1個，優(yōu)選2個，特別優(yōu)選3個和非常優(yōu)選4個選自：C¹和C²、C³和C⁴、C⁵和C⁶、C⁷和C⁸的分子內(nèi)二硫鍵的C-C鍵。

如果半胱氨酸也用于X表示的位置中，那么通式中各半胱氨酸位置的編號可相應(yīng)地改變。

特別有利的多肽是通式(II)的那些多肽：